[发明专利]一种提高香港牡蛎天然采苗效率的预报方法

说明书

技术领域：

本发明属于海洋农业中贝类苗种繁育领域，具体涉及一种提高香港牡蛎天然采苗效率的预报方法。

背景技术：

香港牡蛎Crassostreahongkongensis是我国华南沿海养殖的主要养殖经济种，喜欢生活在近河口或附近有淡水注入的地方，主要分布在广东、广西等地，年产量在130多万吨，产值在80-100亿元（中国渔业年鉴，2013）。

香港牡蛎在我国已有近千年的养殖历史，传统上蚝民们是以天然采作为苗种的唯一来源。学者们很早就开始研究牡蛎的天然采苗，包括对近江牡蛎（胡家财等，1994；陈振汉&李友，1997；莫新，2004，钟方杰等，2012）、葡萄牙牡蛎（宋传福，2013）、长牡蛎等采苗技术研究。但由于采苗预报精确度不足，往往会导致采苗失败，存在稳定性差，苗种相对混杂等缺陷。尤其是与香港牡蛎生活在一起近江牡蛎，俗称红肉，是一种经济价值低劣的废品蚝，在香港牡蛎采苗时，很有可能会有不同比例近江牡蛎苗种混淆，如果混淆比例过高，大大影响了香港牡蛎苗种的经济价值。为此，采苗预报非常重要，传统的牡蛎采苗主要是靠定期观测，在牡蛎繁殖季节到来之前，早早投放附着基，担心采不到牡蛎幼虫。这种做法实际上存在着一些问题，牡蛎幼虫是否可以采得到，需要有天时地利人和，更要有科学的采苗预报技术。

发明内容：

本发明的目的是为了打破香港牡蛎苗种长期匮乏局面；提高香港牡蛎天然采苗效率；保证采苗数量、质量；回避多次复采所带来的劳动力及其资源浪费；来提高采苗效率的一种预报方法。

本发明提高香港牡蛎天然采苗效率的预报方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、幼虫采集：在天然海区，当香港牡蛎进入繁殖季节时，定期采集牡蛎样品，观测是否产卵排精，当发现牡蛎受刺激后消瘦，经过10～15天后，受精卵发育至眼点前期幼虫，采集海区表层0.5～1m处的贝类幼虫作为样本；

b、表型分类：对采集的样品，首先通过显微镜观察分类，将牡蛎幼虫、其他双壳贝类幼虫和藤壶幼虫进行区分，确定牡蛎幼虫的占比、牡蛎眼点前期幼虫的占比以及藤壶幼虫的占比；

c、分子识别：随机提取若干个单个牡蛎眼点前期幼虫的DNA，用4种巨蛎属牡蛎的复合COI引物进行复合PCR扩增（Wang&Guo,2008），再经过特异性识别，即可得知牡蛎眼点前期幼虫的种类，确定香港牡蛎眼点前期幼虫/牡蛎幼虫的比例，以及其密度；

所述的4种巨蛎属牡蛎的复合COI引物具体为：

COI引物1：AAAAAAGATTATAACTAATGCATGTCG(T)G

COI引物2：AGTTACCAAACCCCCCAATTATCAG(C)G

COI引物3：GGAGTAAGTGGATAAGGGTGGATAG

COI引物4：AAGTAACCTTAATAGATCAGGGAAC(A)C

LCO1490：GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG

HC02198：TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA

LCO1490和HC02198是巨蛎属牡蛎的通用引物，只要是巨蛎属牡蛎，用COI基因组D NA作为模板的话，都能扩增出一条都有的条带；

d、综合评估：当香港牡蛎眼点前期幼虫/牡蛎幼虫的比例≥70%，香港牡蛎眼点前期幼虫的密度≥50个/m³，敌害生物藤壶幼虫/牡蛎幼虫的比例≤10%时，即达到采苗要求；

e、适时采苗：当香港牡蛎眼点前期幼虫发育至眼点后期阶段时，发送采苗预报，投放附着基至海区，即可采收到大量天然香港牡蛎苗种。

步骤a所述的刺激为台风或者暴雨等刺激。

所述的采集海区表层0.5～1m处的贝类幼虫作为样本，采用300目筛绢网进行优选取样。

本发明的4种巨蛎属牡蛎的复合COI引物及其鉴定4种巨蛎属牡蛎的方法公开于Wang,H.,Guo,X.,2008a.IdentificationofCrassostreaariakensisandrelatedoystersbymultiple species-specificPCR.JournalofShellfishResearch27,481–487。