[发明专利]一种病人血液中百草枯的快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学技术领域，具体涉及一种病人血液中百草枯的快速检测方法。

背景技术

我国是世界上农药生产和消费的大国，由于大量的使用农药，农药中毒现象也越来越多。百草枯（paraquat，PQ），又名克无踪、对草快，化学名称为1，1′-二甲基-4，4′-联吡啶二氯化物，分子量257.2，为中等毒性的有机杂环类接触性脱叶剂及除草剂，对人畜有较强的毒性，可经皮肤、呼吸道、消化道吸收造成急性中毒，由于目前尚无特效解毒剂，PQ中毒后死亡率较高，其血浆浓度与死亡率密切相关。临床上，口服百草枯中毒病情可分为以下三型：（1）轻度：口服百草枯＜20mg/kg，患者仅有轻度胃肠道症状，一般能完全恢复，没有明显的后遗症。（2）重度：服毒量20-40mg/kg，仅有部分患者能存活。一般病程：1-4天内出现肾功能损害、肝损害、血压下降、心动过速等症状和体征，1-2周内出现咳嗽、咳血、胸腔积液、肺纤维化，2-3周后进一步发展为呼吸窘迫综合征而死亡。（3）极重度：服毒量＞40mg/kg，几天内出现肝、肾功能衰竭、消化道溃疡、胰腺炎、心肌炎、低血压、昏迷、抽搐，1-4天内死于多器官功能衰竭。由于百草枯中毒机制尚不完全明确，而且缺乏有效特异的治疗手段，其中毒可导致极高的病死率，给急诊医疗工作者带来了巨大的挑战。因此，了解百草枯中毒预后相关因素对于指导临床治疗有重要意义，在过去30年中，许多关于百草枯中毒预后的动物实验和临床研究相继开展，但多数实验均未找到一个评价百草枯中毒预后的早期、有效、实用的特异性指标。

1966年英国医学家Bullivant首先描述了2例PQ意外中毒死亡事件，随后世界各地相继报道了PQ中毒病例并对PQ毒性进行了深入的研究。虽然各国学者对此作了广泛深入的研究，但至今仍未完全明了PQ中毒机制，亦无有效拮抗药物，人口服致死量约为3.0g，因而死亡率达90%。若在摄入后6h、8h、24h,血液中PQ浓度超过2mg·L-1、1.2mg·L-1、0.2mg·L-1,则难以存活。国外早在上世纪70年代，就开始对百草枯残留的检测方法进行研究，近年来在这方面的研究工作取得了较快的进展。高灵敏度的仪器分析法和快速有效的免疫分析法正逐渐被应用于百草枯残留的检测，其中最广泛的当属高效液相色谱仪。国内虽已有关于血气分析与百草枯中毒预后相关的研究报道，目前临床上常通过连二亚硫酸钠间接测定中毒者血中百草枯浓度。但对血液中百草枯浓度测要求较高，国内多数医院尚无法开展该检查。血浆百草枯浓度0.5～2小时即可达到峰值，而后迅速分布到周围组织，故中毒早期监测其浓度意义更大。

随着PQ在我国生产和使用量的增加，急性PQ中毒人数也逐年增加。中毒致死患者约90%是自杀性口服所致，而且主要发生在农村。PQ口服病死率达60%-90%，且存活者中绝大多数存在肺纤维化，预后极差，基层地区由于缺乏对PQ中毒认识病死率更高。PQ中毒已成为严重影响我国人民群众健康的急危重症，超越毒鼠强和有机磷中毒成为致死性最高的农药中毒事件。因此，建立快速、灵敏、准确的检测技术是目前迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种病人血液中百草枯的快速检测方法，主要采用高效液相色谱法对病人血液中百草枯的浓度进行含量测定，并研究一种快速、准确的制备含药血清的方法，建立安全、有效、快速的百草枯检测方法。

本发明所要解决的技术问题采用以下技术方案来实现：

一种病人血液中百草枯的快速检测方法

1）百草枯高效液相色谱（HPLC）法的建立

高效液相色谱法条件：岛津LC-20AT高效液相色谱仪，色谱柱shim-pack:vp-ODS（其中shim-pack:vp-ODS所代表的的是柱子的型号，是岛津公司的一款反相高效液相色谱柱），柱：4.6mm*250mm，5μm，流动相：乙腈-0.02mol/L辛烷基磺酸钠（40:60），辛烷基磺酸钠用0.26moL/L的磷酸调pH值为2.5；流速：1.0mL·min^-1；柱温25℃；检测波长254nm；

2）PQ含药血清的制备

对照品的制备

精密吸取健康人血清200μL，加入已知浓度的PQ水溶液100μL，加入乙腈400μL混漩1min，3500r/min^-1离心10min，取上清液,10000r/min^-1离心10min，取上清液进行HPLC分析，得对照品峰面积Ar；

样品的制备