[发明专利]一种同时快速筛查鉴定乳制品中多种有机酸的离子色谱-高分辨质谱联用方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种同时快速筛查鉴定乳制品中多种有机酸的离子色谱-高分辨质谱联用方法。

背景技术

乳制品中的有机酸具有抑制有害菌的繁殖、提供不同风味的作用，在乳制品产品中广泛存在。其主要来源分为生产添加和天然产物两种途径：生产加工过程常使用苹果酸、酒石酸、柠檬酸、富马酸、磷酸等作为酸度调节剂；天然有机酸主要是由乳脂肪水解产生自由脂肪酸如乙酸、丁酸，牛的生理代谢产生柠檬酸、乳清酸、尿酸，细菌及乳酸菌的分解代谢产生乳酸、乙酸、丙酮酸、丙酸、甲酸，同型乳酸发酵将几乎全部的碳源经丙酮酸代谢转化为乳酸，也可以产生其它有机酸及风味代谢产物。

由于其相对较高的安全性，除富马酸外，我国的国家标准中对这些有机酸的使用并没有限量规定，最大使用量为“根据生产需要”而定。但实验研究表明，长期食用或食入过量有机酸同样会对人体产生损害，秦淑贞等在小鼠中进行的急性毒性试验结果显示：柠檬酸本身毒性轻微，但与重金属螯合后会导致肝细胞弥漫性坏死，肝小叶消失。

为避免在食品生产过程中不法商贩无限制、无量的使用有机酸，世界上很多组织和国家都对有机酸的使用范围和限量都作了相应规定：国际食品法典委员会（ACA）规定水果汁中柠檬酸限量3000mg/kg，酒石酸限量4000mg/kg，婴幼儿的补充食品中乳酸限量2000mg/kg，乙酸限量5000mg/kg，生面制品、面条中富马酸限量700mg/kg；欧盟规定干制粉状甜品混合物中富马酸限量4000g/kg，饼干和面包干中酒石酸限量5000g/kg；我国台湾尤其单独规定婴儿食品中不得使用苹果酸。

目前，食品、环境、化工、医学等领域的检测技术中，针对阴离子、阳离子、水溶性和极性小分子化合物常采用离子色谱分析技术。但是，离子色谱仪检测时间较长，通常为40-60min，且仅凭保留时间作为定性定量依据，无法提供结构信息，对于保留时间相同的物质无法进一步进行结构上的确认，从而易导致假阳性结果。

质谱技术可以在分析过程中提供更准确的定性定量检测，近年来有关离子色谱质谱联用技术已有报道，法芸等利用毛细管离子色谱质谱联用分析装置进行有机酸、糖、醇等水溶性组分的分析，但其采用的低分辨质谱仅能对已提供标准品的既定化合物进行分析，无法对难以获取标准物质的、或无法规要求的非既定化合物进行筛查，难以满足当今世界各地法律法规频繁更新的检测要求；且低分辨质谱在采集开始前即已设定参数，一旦采集无法反复调用多层数据。

高分辨质谱具有质量分辨率高和精确分子量的功能，因此对样品前处理的要求降低，有效的节省了样品前处理时间；且由于其高分辨的优势，无需在色谱分离上进行分段分离即可将待测组分识别，色谱分离时间由此由原来的50-60min缩短为30min左右；高分辨质谱在全扫描模式下采集的数据可以根据检测需求反复调用，在不提供标准物质的情况下仍然能够进行筛查分析，由此弥补传统低分辨质谱方法的不足；其数据依赖性扫描可以在筛查的同时，通过碎片离子进行定性确证。近年来通过与液相色谱串联的方式在食品检测、蛋白质组学等方面已开始逐渐应用，但在与离子色谱串联应用的检测领域尚属空白。

发明内容

本发明提供一种同时快速筛查鉴定乳制品中多种有机酸的离子色谱-高分辨质谱联用方法。

一种同时快速筛查鉴定乳制品中多种有机酸的离子色谱-高分辨质谱联用方法，包括以下步骤：

将待测样品用氢氧化钾溶液提取，提取液用反相填料前处理小柱净化，使用IonPac AS19色谱柱分离，KOH淋洗液洗脱，之后在负离子模式下用Orbitrap高分辨检测器全扫描模式检测，根据测得的数据进行筛查和鉴定；

优选地，色谱条件为：

柱温：35℃；

流速：0.25mL/min；

流动相：30mM KOH；

质谱条件为：

电喷雾离子源；

喷雾电压：5.00kV

质荷比范围：50-300

毛细管电压：-21.00V

管透镜电压：-128.70V

毛细管温度：350℃；

鞘气(N2)流速：17L/min(即30arb)；

辅助气(N2)流速：8L/min(即10arb)；

分辨率R=60000。

进一步地，氢氧化钾溶液的质量浓度为1％。

进一步地，所述反相填料前处理小柱是RP前处理小柱。