[发明专利]纳米氧化铜增强荧光测定乳酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及纳米氧化铜作为模拟过氧化物酶催化过氧化氢氧化对苯二甲酸增强荧光测定乳酸的方法，属于分析化学和纳米技术领域。

背景技术

  乳酸为体内糖酵解的最终产物。代谢性酸中毒中最常见的一种类型为乳酸浓度升高性酸中毒, 如呼吸衰竭、组织缺氧、败血症、恶性肿瘤导致组织耗氧量增加、糖尿病酮血症都可引起乳酸浓度升高。因此, 测定血中乳酸浓度, 对早期诊断和处理高乳酸血症和乳酸酸中毒具有非常重要的临床价值。

荧光，是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线或X射线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的波长长的出射光；而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。近年来由于荧光分析法具有灵敏度高，线性范围宽,分析成本低，设备操作简单以及提供信息量大等优点，已经在分析化学﹑环境科学﹑临床医学等领域吸引了人们的广泛关注。

本发明基于纳米氧化铜作为模拟过氧化物酶催化过氧化氢氧化对苯二甲酸增强荧光，结合乳酸氧化酶催化氧化乳酸产生过氧化氢的反应，提供一种纳米氧化铜为催化剂测定乳酸的荧光分析方法。

发明内容

本发明的目的是基于纳米氧化铜作为模拟过氧化物酶催化过氧化氢氧化对苯二甲酸增强荧光，结合乳酸氧化酶催化氧化乳酸产生过氧化氢的反应，提供一种纳米氧化铜为催化剂测定乳酸的荧光分析方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：所述一种纳米氧化铜为催化剂测定乳酸的荧光分析方法，其特征是首先将乳酸、乳酸氧化酶和磷酸盐缓冲液三者混合温浴进行乳酸氧化酶酶促反应，然后向其中加入磷酸盐缓冲液、对苯二甲酸和纳米氧化铜继续温浴进行荧光反应，用荧光分光光度计测定上述混合液反应产物的荧光强度。

所述的荧光反应产物的最大激发波长和发射波长分别为315 nm和421 nm。

所述的乳酸氧化酶酶促反应体系pH值优选为7.0，乳酸氧化酶浓度优选为0.035 U/mL。

所述的乳酸氧化酶酶促反应温度优选为37 ℃，反应时间优选为10分钟。

所述的荧光反应体系的pH 值优选为7.0，纳米氧化铜浓度优选为0.4 mg/L，对苯二甲酸浓度优选为3.0 mmol/L。

所述的荧光反应温度优选为45 ℃，反应时间优选为120分钟。

本发明所述的利用纳米氧化铜为催化剂测定乳酸的荧光分析方法，其特征是在EP管中分别加入50 μL浓度为0.35 U/mL的乳酸氧化酶、50 μL浓度为200 mmol/L 、pH 7.0的磷酸盐缓冲溶液和0.4 mL不同浓度的乳酸溶液而形成不同乳酸浓度的混合液，将上述不同乳酸浓度的混合液分别置于37 ℃温浴，10分钟后向其中加入3.65 mL 浓度为200 mmol/L、pH 7.0的磷酸盐缓冲液，0.8 mL浓度为18.75 mmol/L的对苯二甲酸和50 μL浓度为40 mg/L的纳米氧化铜，45℃温浴，120分钟后分别测定其在421 nm处的荧光强度，激发波长为315 nm，以荧光强度对乳酸浓度作图得到标准曲线以用于测定乳酸。

所述的纳米氧化铜由如下步骤制得：1）取0.02 mol/L的醋酸铜溶液150 ml和0.5 ml冰醋酸加入到装有冷凝管的三颈瓶中，搅拌加热至沸腾；2）快速加入0.04 g/ml的氢氧化钠溶液10 ml,加完后继续搅拌5分钟，得到褐色氧化铜沉淀；3）将反应得到的黑色氧化铜沉淀离心，用无水乙醇洗涤三次，减压干燥，即得纳米氧化铜粉体。

本发明所述的利用纳米氧化铜为催化剂测定血清乳酸含量的荧光分析方法，其特征是它由以下步骤组成：（1）在EP管中分别加入稀释后的血清、乳酸氧化酶和磷酸盐缓冲液混合温浴；（2）向上述EP管中加入磷酸盐缓冲液，对苯二甲酸和纳米氧化铜继续温浴；（3）将反应产物置于荧光分光光度计中检测荧光强度，根据乳酸标准曲线测定血清中乳酸浓度。