[发明专利]纳米氧化铜增强荧光测定乳酸的方法

权利要求书

1.一种纳米氧化铜为催化剂测定乳酸的荧光分析方法，其特征是首先将乳酸、乳酸氧化酶和磷酸盐缓冲液三者混合温浴进行乳酸氧化酶酶促反应，然后向其中加入磷酸盐缓冲液、对苯二甲酸和纳米氧化铜继续温浴进行荧光反应，用荧光分光光度计测定上述混合液反应产物的荧光强度。

2.根据权利要求1所述的纳米氧化铜为催化剂测定乳酸的荧光分析方法，其特征是荧光反应产物的最大激发波长和发射波长分别为315 nm和421 nm。

3.根据权利要求1所述的纳米氧化铜为催化剂测定乳酸的荧光分析方法，其特征是乳酸氧化酶酶促反应体系pH值为7.0，乳酸氧化酶浓度为0.035 U/mL。

4.根据权利要求1所述的纳米氧化铜为催化剂测定乳酸的荧光分析方法，其特征是乳酸氧化酶酶促反应温度为37 ℃，反应时间为10分钟。

5.根据权利要求1所述的纳米氧化铜为催化剂测定乳酸的荧光分析方法，其特征是荧光反应体系的pH 值为7.0，纳米氧化铜浓度为0.4 mg/L，对苯二甲酸浓度为3.0 mmol/L。

6.根据权利要求1所述的纳米氧化铜为催化剂测定乳酸的荧光分析方法，其特征是荧光反应温度为45 ℃，反应时间为120分钟。

7.一种利用纳米氧化铜为催化剂测定乳酸的荧光分析方法，其特征是在EP管中分别加入50 μL浓度为0.35 U/mL的乳酸氧化酶、50 μL浓度为200 mmol/L 、pH 7.0的磷酸盐缓冲溶液和0.4 mL不同浓度的乳酸溶液而形成不同乳酸浓度的混合液，将上述不同乳酸浓度的混合液分别置于37 ℃温浴，10分钟后向其中加入3.65 mL 浓度为200 mmol/L、pH 7.0的磷酸盐缓冲液，0.8 mL浓度为18.75 mmol/L的对苯二甲酸和50 μL浓度为40 mg/L的纳米氧化铜，45℃温浴，120分钟后分别测定其在421 nm处的荧光强度，激发波长为315 nm，以荧光强度对乳酸浓度作图得到标准曲线以用于测定乳酸。

8.根据权利要求1或2或3或4或5或6或7所述的荧光分析方法，其特征是所述的纳米氧化铜由如下步骤制得：1）取0.02 mol/L的醋酸铜溶液150 ml和0.5 ml冰醋酸加入到装有冷凝管的三颈瓶中，搅拌加热至沸腾；2）快速加入0.04 g/ml的氢氧化钠溶液10 ml,加完后继续搅拌5分钟，得到褐色氧化铜沉淀；3）将反应得到的黑色氧化铜沉淀离心，用无水乙醇洗涤三次，减压干燥，即得纳米氧化铜粉体。

9.一种利用纳米氧化铜为催化剂测定血清乳酸含量的荧光分析方法，其特征是它由以下步骤组成：（1）在EP管中分别加入稀释后的血清、乳酸氧化酶和磷酸盐缓冲液混合温浴；（2）向上述EP管中加入磷酸盐缓冲液，对苯二甲酸和纳米氧化铜继续温浴；（3）将反应产物置于荧光分光光度计中检测荧光强度，根据乳酸标准曲线测定血清中乳酸浓度。

10.根据权利要求9所述的利用纳米氧化铜为催化剂测定血清乳酸含量的荧光分析方法，其特征是在EP管中分别加入50 μL浓度为0.35 U/mL的乳酸氧化酶、50 μL浓度为200 mmol/L、pH 7.0的磷酸盐缓冲溶液和0.4 mL稀释40倍的血清样品而形成混合液，将上述混合液置于37 ℃温浴，10分钟后向其中加入3.65 mL 浓度为200 mmol/L、pH 7.0的磷酸盐缓冲液，0.8 mL浓度为18.75 mmol/L的对苯二甲酸和50 μL浓度为40 mg/L的纳米氧化铜，45℃温浴，120分钟后测定其在421 nm处的荧光强度，激发波长为315 nm；所述的纳米氧化铜由如下步骤制得：1）取0.02 mol/L的醋酸铜溶液150 ml和0.5 ml冰醋酸加入到装有冷凝管的三颈瓶中，搅拌加热至沸腾；2）快速加入0.04 g/ml的氢氧化钠溶液10 ml,加完后继续搅拌5分钟，得到褐色氧化铜沉淀；3）将反应得到的黑色氧化铜沉淀离心，用无水乙醇洗涤三次，减压干燥，即得纳米氧化铜粉体。