[发明专利]PPP1R12A基因在结直肠癌化疗疗效判断和检测试剂盒中的应用

说明书

[技术领域]

本发明属于肿瘤生物学领域，涉及一种结直肠癌基因标志物及其应用，具体涉及结直肠癌中检测PPP1R12A基因相对拷贝数的试剂盒、方法和应用。

[背景技术]

结直肠癌是最为常见的恶性肿瘤之一，中国地区的发病率上升趋势十分明显，位居全部恶性肿瘤第三位，严重威胁人类健康。

临床上第三代铂类药物奥沙利铂奥沙利铂，联合5氟尿嘧啶和四氢叶酸的FOLFOX方案是目前进展期结直肠癌的一线化疗方案，但是仍有50%的人对化疗不敏感，其主要的原因是对于奥沙利铂化疗药物原始的或获得性的耐药性。这种耐药性的产生与化疗药物的运输、DNA修复、DNA损伤耐受和凋亡等多种相关基因的参与有关。因此，发现化疗疗效相关的基因诊断标志物对患者选择合适的化疗药物并从中获得临床受益具有重要的临床意义。

PPP1R12A，称为磷酸酶1调节亚基12A，又称为肌球蛋白磷酸酶结合亚基（MYPT-1），能够与肌球蛋白磷酸酶δ催化亚基结合，调控磷酸酶的特异性和活性（Grassie ME,Moffat LD,Walsh MP，Macdonald JA（2011）The myosin phosphatase targeting protein(MYPT)family:a regulated mechanism for achieving substrate specificity of the catalytic subunit of protein phosphatase type1delta.Archives of Biochemistry and Biophysics510:147–159）。PPP1R12A在多种类型细胞中表达，并且在平滑肌细胞中达到高表达（Matsumura F，Hartshorne DJ（2008）Myosin phosphatase target subunit:many roles in cell function.Biochemical and Biophysical Research Communications369：149–156）。PPP1R12A的一个生物学特点是与PP1cδ磷酸酶形成复合物，调控PP1cδ磷酸酶对其底物-磷酸化肌球蛋白的去磷酸化作用，从而调控肌肉的压缩和细胞迁移。

除此之外，有研究发现PPP1R12A还参与调控了肿瘤抑制基因Merlin的活性（Jin H,Sperka T,Herrlich P,Morrison H（2006）Tumorigenic transformation by CPI-17through inhibition of a merlin phosphatase.Nature442:576-579）。当细胞密度过高时，Merlin发生去磷酸化，能够与细胞表面的CD44结合，抑制细胞增殖（Shaw RJ,Paez JG,Curto等（2001）The Nf2tumor suppressor,merlin,functions in Rac-dependent signaling.Dev Cell1:63-72）。Merlin缺失杂合子小鼠在多种器官肺、肝脏和骨长出恶性肿瘤（McClatchey AI,Saotome I,Mercer K等（1998）Mice heterozygous for a mutation at the Nf2tumor suppressor locus develop a range of highly metastatic tumors.Genes Dev12:1121-1133）。Merlin去磷酸化对它维持抑癌基因的功能非常重要，而Merlin去磷酸化是通过PPP1R12A和PP1δ调控。其中，PPP1R12A蛋白C端有一个亮氨酸拉链结构，能够与Merlin C端（第314-第595位氨基酸）结合，并且偏好结合磷酸化的Merlin，PPP1R12A同时也能与磷酸酶PP1δ结合，从而介导了磷酸酶PP1δ对Merlin的去磷酸化。一旦利用蛋白酶降解PPP1R12A之后，Merlin的去磷酸化水平降低。