[发明专利]溪黄草药材HPLC指纹图谱的建立及其指纹图谱

说明书

技术领域

本发明涉及中药药材的质量控制方法，具体涉及溪黄草药材高效液相色谱法指纹图谱的构建方法和标准指纹图谱。

背景技术

溪黄草原植物为唇形科香茶菜属植物线纹香茶菜Isodon lophanthoides(Buch.-Ham.ex D.Don)H.Hara.的干燥地上部分。主产于长江以南的湖南、湖北、四川、云南、江西、广东、广西、福建等省区。性味苦、甘、寒,归肝、胆经，具有清热利湿、退黄、凉血散瘀的功效，用于治疗湿热黄疸、湿热泻痢、跌打瘀痛、急性黄疸型肝炎、急性胆囊炎、痢疾、肠炎等疾病。

溪黄草为华南地区民间习用草药。溪黄草作为清肝利胆药在广东大部分地区民间有着很长的使用历史。民间和历代名医把溪黄草用作清热祛湿、利胆退黄药，治疗急性黄疸型肝炎、急性胆囊炎，为预防和治疗肝胆疾病的常用药。

现作商品“溪黄草”入药的除线纹香茶菜外，还有同属植物狭基线纹香茶菜R.lophanthoides(Buch.-Ham ex D.Don)Hara var.gerardiana(Benth.)Hara、纤花香茶菜R.lophanthoides(Buch.-Ham ex D.Don)Hara var.gracilifl ora(Benth.)Hara和溪黄草R.serra(Maxim.)Hara。广东部颁标准和国家药典2010版（附录）对溪黄草的基源收载以及学者间都存在争议。中药溪黄草来源复杂，同名异物、品种混乱普遍，且这类植物外形类似，开花前和干品都不易鉴别。为保证和提高药材质量，促进中药标准化，在研究过程中应重视对所用药材作基源鉴定；并应对多来源药材在鉴定、化学、药理和临床进一步比较研究，以便在各种药材之间找出功效、主效异同点，为临床用药的安全、有效提供准确可靠的依据。

发明内容

本发明的目的为溪黄草药材的质量控制和真伪鉴别提供一个新的方法，通过建立溪黄草药材指纹图谱的方法，并由此方法得到溪黄草药材共有模式的指纹图谱。

为达到本发明的目的所采用的技术方案：用高效液相色谱法建立溪黄草药材指纹图谱的方法，具体包括如下步骤：

①、对照品溶液的制备：精密称取对照品咖啡酸、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素、牡荆苷和迷迭香酸，以甲醇为溶剂，配成咖啡酸浓度为0.092mg/mL、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素为0.238mg/mL、牡荆苷为0.179mg/mL和迷迭香酸为0.115mg/mL的混合对照品溶液。；

②、样品溶液的制备：精密称定溪黄草药材粉末，精密加入50%乙醇20mL,称摇匀，滤过，作为供试品溶液；

③、色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为乙腈-磷酸组成的梯度洗脱液，紫外检测波长为230～270nm；

④、测定：精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

进一步优选的方法可以通过下述步骤实施：

①、对照品溶液的制备：精密称取对照品咖啡酸、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素、牡荆苷和迷迭香酸，以甲醇为溶剂，配成咖啡酸浓度为0.092mg/mL、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素为0.238mg/mL、牡荆苷为0.179mg/mL和迷迭香酸为0.115mg/mL的混合对照品溶液。；

②、样品溶液的制备，取溪黄草药材粉末1.0g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇20mL,称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用0.22μm微孔滤膜滤过，作为样品溶液；

所述步骤；

③、色谱条件，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为0.1%～0.3%乙腈-磷酸组成的梯度洗脱液，柱温：25～40℃，紫外检测波长为230～270nm，时间100～120min；

④、测定，采用精密吸取样品溶液10～20μL注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

本发明最佳的检测方法可以通过下述步骤实施: