[发明专利]溪黄草药材HPLC指纹图谱的建立及其指纹图谱

权利要求书

1.一种溪黄草药材指纹图谱的建立方法，其特征在于采用高效液相色谱法，具体包括如下步骤：

①、对照品溶液的制备：精密称取对照品咖啡酸、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素、牡荆苷和迷迭香酸，以甲醇为溶剂，配成咖啡酸浓度为0.092mg/mL、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素为0.238mg/mL、牡荆苷为0.179mg/mL和迷迭香酸为0.115mg/mL的混合对照品溶液；

②、样品溶液的制备：准确称定溪黄草药材粉末，精密加入50%乙醇20mL，摇匀，滤过，作为供试品溶液；

③、色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为乙腈-磷酸组成的梯度洗脱液，紫外检测波长为230～270nm；

④、测定：精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的一种溪黄草药材指纹图谱的建立方法，其特征在于：

所述步骤②样品溶液的制备，取溪黄草药材粉末1.0g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇20mL，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用0.22μm微孔滤膜滤过，作为供试品；

所述步骤③色谱条件，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为乙腈-0.1%～0.3%磷酸组成的梯度洗脱液，柱温：25～40℃，紫外检测波长为230～270nm，时间100～120min；

所述步骤④测定，采用精密吸取样品溶液10～20μL注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

3.根据权利要求1所述的一种溪黄草药材指纹图谱的建立方法，其特征在于：

所述步骤②样品溶液的制备，取溪黄草药材粉末1.0g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇20mL，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用0.22μm微孔滤膜滤过，作为样品溶液；

所述步骤③色谱条件中流动相为乙腈-0.3%磷酸组成的梯度洗脱液，流速为0.8mL/min，柱温：30℃，紫外检测波长为254nm，分析时间120min。

4.根据权利要求2或3所述的一种溪黄草药材指纹图谱的建立方法，其特征在于：

所述步骤③色谱条件中所述的梯度洗脱，梯度洗脱程序以如下体积浓度配置进行：

0分钟时，流动相A为8%的乙腈溶液、流动相B为92%的0.3%的磷酸溶液；

5分钟时，流动相A为12%的乙腈溶液、流动相B为88%的0.3%的磷酸溶液；

30分钟时，流动相A为18%的乙腈溶液、流动相B为82%的0.3%的磷酸溶液；

60分钟时，流动相A为23%的乙腈溶液、流动相B为77%的0.3%的磷酸溶液；

80分钟时，流动相A为50%的乙腈溶液、流动相B为50%的0.3%的磷酸溶液；

100分钟时，流动相A为70%的乙腈溶液、流动相B为30%的0.3%的磷酸溶液；

120分钟时，流动相A为90%的乙腈溶液、流动相B为10%的0.3%的磷酸溶液。

5.一种溪黄草药材的指纹图谱，其特征在于：

溪黄草药材指纹图谱的建立，具体包括如下步骤

①、对照品溶液的制备：精密称取对照品咖啡酸、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素、牡荆苷和迷迭香酸，以甲醇为溶剂，配成咖啡酸浓度为0.092mg/mL、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素为0.238mg/mL、牡荆苷为0.179mg/mL和迷迭香酸为0.115mg/mL的混合对照品溶液；

②、样品溶液的制备：精密称定溪黄草药材粉末，精密加入50%乙醇20mL，摇匀，滤过，作为供试品溶液；

③、色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为乙腈-磷酸组成的梯度洗脱液，紫外检测波长为230～270nm；

④、测定：精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

6.一种溪黄草药材的指纹图谱，其特征在于：通过高效液相色谱仪获得的指纹图谱是联合运用色谱峰保留时间（t）和二极阵列检测器采集各色谱峰紫外光谱（UV）确定4个特征峰(见图2和图3)；其中，S4号峰（迷迭香酸）的峰高最高（见图1），且均为4个品种溪黄草药材均含有的色谱峰，峰面积最大，与相邻峰分离度较好，在测定时比较稳定，因此选作参照峰；咖啡酸、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素、牡荆苷和迷迭香酸均为线纹香茶菜、狭基线纹香茶菜和纤花线纹香茶菜共有的色谱峰(分别为2-S1、3-S2、5-S3、9-S4峰)，而溪黄草仅有咖啡酸和迷迭香酸峰（分别为3-S1、15-S4峰）；指纹图谱中特征峰的差异可作为区别溪黄草与正品线纹香茶的标准。