[发明专利]一种汞离子的超灵敏检测方法及检测试剂盒

权利要求书

1.一种汞离子的超灵敏检测方法，包括如下步骤

（1）构建茎环结构DNA：所述茎环结构DNA的3’端适当延伸，凸出在茎环结构外，凸出部分含有T碱基；

（2）构建辅助DNA：所述辅助DNA的5’端含有T碱基，在有汞离子存在时能与茎环结构DNA的3’端通过形成T-Hg²⁺-T复合物互补，从而打开茎环结构DNA，并形成含有3’平末端的部分互补的双链DNA；

（3）将待检样品与茎环结构DNA、辅助DNA混合后，静置反应；

（4）往步骤（3）的反应液中加入核酸外切酶III，在有汞离子存在的情况下，茎环结构DNA和辅助DNA通过T-Hg²⁺-T复合物互补，形成含有3’平末端的部分互补双链DNA，核酸外切酶III能与部分互补的双链DNA中的3’平末端结合，从而开始切割反应，释放单核苷酸以及汞离子，最后释放出单链DNA，所述单链DNA含有茎环结构DNA的环状区和5’端茎状区；

（5）通过检测步骤（4）释放出的单链DNA来判断待检样品中是否含有汞离子。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在汞离子存在的情况下，辅助DNA的5’段与茎环结构DNA的3’端的突出部分及部分茎状区互补，且辅助DNA的3’末端有至少4个碱基不能与茎环结构DNA互补形成平末端。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述茎环结构DNA中，环状区部分的碱基数为9～12，茎状区部分的碱基数为18～21个，茎状区的碱基数比环状区的碱基数多。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述茎环结构DNA的突出部分以及辅助DNA的5’端均含有1～5个T碱基。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（5）可采用电化学法、荧光法、比色法、电化学发光法或试纸条法检测释放出的单链DNA。

6.根据权利要求1或5所述的检测方法，其特征在于，步骤（5）采用试纸条法检测释放出的单链DNA，所述试纸条包括样品垫、金标垫、含有检测区和质控区的硝酸纤维素膜以及吸水纸；

所述金标垫上喷射有金标DNA探针1，所述金标DNA探针1与茎环结构DNA的环状区互补；

所述检测区上固定有DNA探针2，所述DNA探针2与茎环结构DNA的5’端茎状区互补；

所述质检区上固定有DNA探针3，所述DNA探针3与DNA探针1互补。

7.一种汞离子的超灵敏检测试剂盒，其包括：

（1）茎环结构DNA：所述茎环结构DNA的3’端适当延伸，凸出在茎环结构外，凸出部分含有T碱基；

（2）辅助DNA：所述辅助DNA的5’端含有T碱基，在有汞离子存在时能与茎环结构DNA的3’端通过形成T-Hg²⁺-T复合物互补，从而打开茎环结构DNA，形成含有3’平末端的部分互补的双链DNA；

（3）核酸外切酶III；

（4）检测试纸条。

8.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于所述检测试纸条包括样品垫、金标垫、含有检测区和质控区的硝酸纤维素膜以及吸水纸；

所述金标垫上喷射有金标DNA探针1，所述金标DNA探针1与茎环结构DNA的环状区互补；

所述检测区上固定有DNA探针2，所述DNA探针2与茎环结构DNA的5’端茎状区互补；

所述质检区上固定有DNA探针3，所述DNA探针3与DNA探针1互补。

9.根据权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，所述DNA探针2用链霉亲和素与生物素修饰。

10.根据权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，所述DNA探针3用链霉亲和素与生物素修饰。