[发明专利]一种制备利拉鲁肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽类药物的制备方法，是一种合成的具有胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂的长效II型糖尿病的治疗特效药-利拉鲁肽的制备方法。

背景技术

利拉鲁肽，英名为：Liraglutide，结构式如下： 

肽序列为：

H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N-ε-(N-α-Palmitoyl-L-γ-glutamyl))-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH

利拉鲁肽是由丹麦诺和诺德公司开发的第一个也是目前唯一一个长效GLP-1类似物，具有GLP-1受体激动剂作用，在分子结构、生物活性、作用靶点及免疫原性等方面与GLP-1相似。利拉鲁肽的分子结构与GLP-1(7-37) 的同源性达97％，结构差异表现在Lys³⁴ 被Arg 替代，Lys²⁶ 经由谷氨酸介导发生棕榈酰化，脂肪酸侧链可以使利拉鲁肽在血夜中与白蛋白可逆性地结合，使利拉鲁肽的作用时间延长，且增强对DPP-4酶降解的抵抗，脂肪酸侧链还可以使利拉鲁肽分子在注射部位自交联成七聚体，从而延缓其自皮下吸引，使其作用时间可长达接近24小时，每天注射一次并且可在任意时间注射，且低血糖发生风险小。此外，本品还能够以血糖依赖性方式降低胰高血糖素的分泌，并延迟胃排空。

诺和诺德的利拉鲁肽通过基因工程等生物学方法进行制备，技术难度大，生产成本高，不利于利拉鲁肽的大规模生产。US6268343B1和US6458924B2报道了利拉鲁肽的固液合成法，中间体GLP-1(7-37)-OH均需要反相HPLC纯化，再在液相条件下与N^α-Palmitoyl-Glu(OSu)-OtBu反应，此方法需两次纯化，合成周期长，废液多，成本昂贵，不利于大规模生产的缺点。

WO2013037266A1公开了一种利拉鲁肽的制备方法，具体步骤为：通过Fmoc固相合成法，按照利拉鲁肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中赖氨酸采用Fmoc-Lys (Alloc）-OH，脱去Alloc，通过固相合成法在赖氨酸侧链氨基上偶联Palmitoyl-Glu-Offiu，裂解后得到产品。此方法由于使用四（三苯基膦）钯脱去Alloc，不仅使成本偏高，不利于大规模生产，还会使金属残留导致重金属含量超标，导致产品质量和含量不高。

综上所述，现有利拉鲁肽的固相合成过程中，由于合成周期长，成本高，收率低，杂质多，不适用于工业化生产。

本发明人用现有的合成方法，制备利拉鲁肽，发现合成步骤较多，合成周期长，纯度和收率不高，不适于工业化规模生产。为此，本发明人对利拉鲁肽的合成方法进行了研究，从而得到了本发明的技术方案。

发明内容

本发明的目的是提供一种利拉鲁肽的固相合成方法。本发明需要解决的技术问题是：合成周期长，成本高，收率低，杂质多，不适用于工业化生产。

本发明的合成路线如图1所示：首先通过液相方法合成赖氨酸三肽片段Fmoc-Lys-(Glu(N^α-Palmitoyl)-OtBu)-OH，其次在活化剂系统的存在下，由树脂固相载体和Fmoc-Gly-OH偶联得到Fmoc-Gly-树脂，然后通过固相合成法，按照利拉鲁肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中赖氨酸三肽片段采用Fmoc-Lys-(Glu(N^α-Palmitoyl)-OtBu)-OH，最后裂解，纯化，冻干，得到利拉鲁肽。

本发明中一些常用的缩写具有以下含义；

Fmoc ：芴甲氧羰基

Fmoc-AA ：芴甲氧羰基保护的氨基酸

DIC ：N，N′-二异丙基碳化二亚胺

DCC ：N，N′-二环己基碳二亚胺

PyBOP : 六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷

HATU : 2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯

HOBt ：1- 羟基苯骈三唑

HOSu ： N-羟基琥珀酰亚胺

tBu ：叔丁基

Trt ：三苯甲基

Boc : 叔丁氧羰基

Palmitoyl ： 棕榈酰基