[发明专利]一种黄曲霉毒素的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种黄曲霉毒素的测定方法，属于食品安全检验技术领域。

背景技术

黄曲霉毒素（Aflatoxins，简写AF）主要是黄曲霉菌和寄生曲霉菌的代谢产物。黄曲霉毒素主要存在于土壤，动植物，各种坚果，特别是花生和核桃中。在大豆，稻谷，玉米，通心粉，调味品，牛奶，奶制品，食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。目前已分离鉴定出12种，包括B₁、B₂、G₁、G2、M1、M2、P1、Q、H1、GM、B2a和毒醇。

黄曲霉毒素的分析方法主要有以薄层层析法、高效液相色谱法和酶联免疫吸附法三种。薄层层析法由于设备简单,易于普及,所以国内外仍在使用,但由于该法样品前处理繁琐,且提取和净化效果不够理想,提取液中杂质较多,因而在展开时影响斑点的荧光强度,双向展开法虽避免了杂质干扰,但增加了操作步骤和时间。目前最能被大家认可的分析方法还是液相色谱分析法，它具有自动化程度高，定量定性准确，检测种类多元的特点，一直是世界各国官方检测方法。但是，目前针对黄曲霉毒素的高效液相色谱分析法均采用免疫亲和柱来富集毒素，酶联免疫分析法提及的抗体的缺点仍然无法避免，因此研究一种新的黄曲霉毒素富集方法以摆脱抗体的缺点。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种操作简单，结果可靠的黄曲霉毒素的测定方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种黄曲霉毒素的测定方法，包括样品提取、标准溶液测定和样品测定步骤，其创新点在于：所述样品提取步骤采用乙腈-水的提取液提取，其中乙腈和水的体积比为84:16；所述标准溶液测定步骤中取黄曲霉毒素B₁、G₁标准储备液用乙腈定容，制备标准系列溶液，处理后利用液相色谱仪进行测定；所述样品检测采用高效液相色谱法检测样品中的黄曲霉毒素，具体检测步骤为：

（1）样品提取：称取样品10g（精确至0.0001g），加入乙腈-水的提取液搅拌30分钟，其中乙腈和水的体积比为84:16，然后用定性滤纸过滤；

（2）标准溶液测定：取黄曲霉毒素B₁、G₁标准储备液10μg/mL，用乙腈定容至5mL，混匀，2～8℃保存三个月；使用时乙腈配成0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.15μg/mL、0.2μg/mL、0.25μg/mL系列标准溶液，吸取标准系列溶液各200μL，在60℃水浴下氮气吹干，加200mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀，30s后于40℃烘箱衍生15min，室温下放入干燥器中1min后以200uL水-乙腈溶解，混匀后全部进自动进样瓶中，利用液相色谱仪进行测定；

（3）样品测定：用高效液相色谱法检测样品中的黄曲霉毒素

色谱条件：色谱柱：AgilentSB C-18（25cm×4.6mm）；流动相：体积百分比为85%的乙腈和15%的水；柱温：30℃，进样量：25mL；流速：1.0mL/min。

取8mL提取过滤液至多功能净化柱，净化柱的收集池内转移2mL净化液到衍生瓶中，60℃下氮吹后，加200mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀，30s后于40℃烘箱衍生15min，室温下干燥1min后以200uL水-乙腈溶解，混匀后全部进自动进样瓶中，上液相色谱仪测定。

（4）黄曲霉毒素的含量计算：黄曲霉毒素按照G₁、B₁ 的顺序出峰，以标准系列的峰面积对浓度分别绘制每种黄曲霉毒素的标准曲线，标准曲线的相关系数r大于0.995，试样通过与标准色谱图保留时间的比较确定每一种黄曲霉毒素的峰，根据每种黄曲霉毒素的标准曲线及试样中的峰面积计算试样中各种黄曲霉毒素含量：

其中：X——试样中每种黄曲霉毒素含量，单位为μg/kg；

A——试样按外标法在标准曲线中对应的浓度，单位为μg/mL；

V——试样提取过程中提取液的体积，单位为mL；

m——试样的取样量，单位为g；

f——浓缩倍数。

进一步的，所述步骤（1）中多功能净化柱为Mycosep^TM228多功能净化柱。

本发明的有益效果：本发明的检测方法操作简单，快速，结果精确可靠；污染少，安全性高，减少对操作人员和环境的污染；检测成本较低，易于推广。

附图说明

图1为本发明实施例1的样品色谱图；