[发明专利]分离循环肿瘤细胞的方法

权利要求书

1.至少一种俘获结合蛋白在制备用于从患有前列腺癌的患者中分离、俘获或富集循环肿瘤细胞的方法的试剂盒中的用途，所述方法包括：

a) 从所述患者中获得生物样品；

b) 获得所述至少一种俘获结合蛋白，其中俘获结合蛋白与固相连接形成固相-俘获结合蛋白复合体，并且其中所述俘获结合蛋白为上皮-间充质转化(EMT)生物标志物俘获抗体；

c) 使生物样品与固相-俘获结合蛋白复合体接触足以使固相-俘获结合蛋白复合体与循环肿瘤细胞上的至少一种EMT生物标志物结合以形成固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体的一段时间，其中所述EMT生物标志物是OB-钙黏着蛋白或N-钙黏着蛋白的至少一种；

d) 通过对样品施加外部磁场，从样品和未结合的磁性颗粒-俘获结合蛋白复合体中分离固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体，从而分离、俘获或富集循环肿瘤细胞；和

e) 证实循环肿瘤细胞，其中证实循环肿瘤细胞包括DAPI染色、β-联蛋白检测、CD45检测和CD31检测，其中如果DAPI染色为阳性，β-联蛋白表达为阳性，CD45表达为阴性，CD31表达为阴性，则所述循环肿瘤细胞得到证实并且具有间充质表型。

2.至少一种俘获结合蛋白在制备用于测定或鉴定患有前列腺癌的患者的循环肿瘤细胞的方法的试剂盒中的用途，所述方法包括：

a) 从所述患者中获得生物样品；

b) 获得所述至少一种俘获结合蛋白，其中俘获结合蛋白与固相连接形成固相-俘获结合蛋白复合体，并且其中所述俘获结合蛋白为上皮-间充质转化(EMT)生物标志物俘获抗体；

c) 使生物样品与固相-俘获结合蛋白复合体接触足以使固相-俘获结合蛋白复合体与循环肿瘤细胞上的至少一种EMT生物标志物结合以形成固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体的一段时间，其中所述EMT生物标志物是OB-钙黏着蛋白或N-钙黏着蛋白的至少一种；

d) 通过对样品施加外部磁场，从样品和未结合的磁性颗粒-俘获结合蛋白复合体中分离固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体，从而测定或鉴定循环肿瘤细胞；和

e) 证实循环肿瘤细胞，其中证实循环肿瘤细胞包括DAPI染色、β-联蛋白检测、CD45检测和CD31检测，其中如果DAPI染色为阳性，β-联蛋白表达为阳性，CD45表达为阴性，CD31表达为阴性，则所述循环肿瘤细胞得到证实并且具有间充质表型。

3.至少一种俘获结合蛋白在制备用于从患有前列腺癌的患者中分离或俘获完整细胞的方法的试剂盒中的用途，其中所述细胞为β-联蛋白阳性、DAPI阳性和CD45阴性，所述方法包括：

a) 从所述患者中获得生物样品；

b) 获得所述至少一种俘获结合蛋白，其中俘获结合蛋白与固相连接形成固相-俘获结合蛋白复合体，并且其中所述俘获结合蛋白为上皮-间充质转化(EMT)生物标志物俘获抗体；

c) 使生物样品与固相-俘获结合蛋白复合体接触足以使固相-俘获结合蛋白复合体与完整细胞上的至少一种EMT生物标志物结合以形成固相-俘获结合蛋白-完整细胞复合体的一段时间，其中所述EMT生物标志物是OB-钙黏着蛋白或N-钙黏着蛋白的至少一种；

d) 通过对样品施加外部磁场，从样品和未结合的磁性颗粒-俘获结合蛋白复合体中分离固相-俘获结合蛋白-完整细胞复合体，从而分离或俘获完整细胞；和

e) 证实循环肿瘤细胞，其中证实循环肿瘤细胞包括DAPI染色、β-联蛋白检测、CD45检测和CD31检测，其中如果DAPI染色为阳性，β-联蛋白表达为阳性，CD45表达为阴性，CD31表达为阴性，则所述循环肿瘤细胞证实并且具有间充质表型。

4.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述EMT生物标志物是OB-钙黏着蛋白。

5.权利要求1-3中任一项的用途，所述方法还包括测定至少一个前列腺癌特异性基因组事件的存在与否。

6.权利要求5的用途，其中所述至少一个前列腺癌特异性基因组事件选自雄激素受体扩增、磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)丧失、跨膜蛋白酶丝氨酸2 (TMPRSS2)基因和ETS相关(ERG)基因的基因融合，及其组合。