[发明专利]用于在甲醇的存在下提高还原当量的可用性，以及用于生产与此有关的己二酸、6-氨基己酸、六亚甲基二胺或己内酰胺的微生物体和方法

权利要求书

1.一种非天然存在的微生物体(NNOMO)，包含：

(A)甲醇代谢途径(MMP)，其中所述生物体包含编码MMP酶(MMPE)的至少一种外源性核酸，所述酶以足够的量被表达以提高在甲醇的存在下还原当量的可用性，其中所述MMP包括：

(i)甲醇脱氢酶(EM9)；

(ii)EM9和甲醛活化酶(EM10)；或

(iii)甲醇甲基转移酶(EM1)和亚甲基四氢叶酸还原酶(EM2)；以及

(B)(i)己二酸途径(AdiP)，

(ii)6-氨基己酸酯(6-ACA)途径(6-ACAP)，

(iii)六亚甲基二胺(HMDA)途径(HMDAP)或

(iv)己内酰胺途径(CapP)。

2.根据权利要求1所述的生物体，其中

(a)所述生物体包含AdiP，以及其中

(1)所述生物体包含编码AdiP酶(AdiPE)的至少一种外源性核酸，所述酶以足够的量被表达以生产己二酸，其中所述AdiP包含(i)3-氧代己二酰基-CoA硫解酶(EA1)；(ii)3-氧代己二酰基-CoA还原酶(EA2)；(iii)3-羟基己二酰基-CoA脱水酶(EA3)；(iv)5-羧基-2-戊烯酰基-CoA还原酶(EA4)；以及(v)己二酰基-CoA水解酶(EA11A)、己二酰基-CoA连接酶(EA11B)、己二酰基-CoA转移酶(EA11C)或磷酸转己二酰酶/己二酸激酶(EA11D)，

(2)所述生物体包含两种、三种、四种或五种外源性核酸，每种均编码AdiPE；和/或

(3)编码AdiPE的所述至少一种外源性核酸是异源性核酸；

(b)所述生物体包含6-ACAP，以及其中

(1)所述生物体包含编码6-ACAP酶(6-ACAPE)的至少一种外源性核酸，所述酶以足够的量被表达以生产6-ACA，其中所述6-ACAP包含(i)EA1；(ii)EA2；(iii)EA3；(iv)EA4；(v)己二酰基-CoA还原酶(醛形成)(EA5)；以及(vi)6-ACA转氨酶(EA6A)或6-ACA脱氢酶(EA6B)；

(2)所述生物体包含两种、三种、四种，五种或六种外源性核酸，每种均编码6-ACAPE；和/或

(3)编码6-ACAPE的所述至少一种外源性核酸是异源性核酸；

(c)所述生物体包括HMDAP，以及其中

(1)所述生物体包含编码HMDA途径酶(HMDAPE)的至少一种外源性核酸，所述酶以足够的量被表达以生产HMDA，其中所述HMDAP包含(i)EA1；(ii)EA2；(iii)EA3；(iv)EA4；(v)EA5；(vi)EA6A或EA6B；(vii)6-氨基己酰基-CoA/酰基-CoA转移酶(EA7A)或6-氨基己酰基-CoA合酶(EA7B)；(viii)6-氨基己酰基-CoA还原酶(醛形成)(EA9)；以及(ix)HMDA转氨酶(EA10A)或HMDA脱氢酶(EA10B)；

(2)所述生物体包含两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种或九种外源性核酸，每种均编码HMDAPE；和/或

(3)编码HMDAPE的所述至少一种外源性核酸是异源性核酸；或

(d)所述生物体包含CapP，以及其中

(1)所述生物包含编码CapP酶(CapPE)的至少一种外源性核酸，所述酶以足够的量被表达以生产己内酰胺，其中所述CapP包含

(a)(i)EA1；(ii)EA2；(iii)EA3；(iv)EA4；(v)EA5；(vi)EA6A或EA6B；以及(vii)EA7A或EA7B；或

(b)(i)EA1；(ii)EA2；(iii)EA3；(iv)EA4；(v)EA5；(vi)EA6A或EA6B；以及(vii)酰胺水解酶(EA8)；

其中所述CapP可选地进一步包括将6-氨基己酰基-CoA转化为己内酰胺的自发的环化作用；

(2)所述生物包含两种、三种、四种、五种、六种或七种外源性核酸，每种均编码CapPE；和/或

(3)编码CapPE的所述至少一种外源性核酸是异源性核酸。