[发明专利]有关癌症发展及对治疗的反应的快速预测

权利要求书

1.一种通过从活检体或以手术方式取出的肿瘤获得的原发肿瘤细胞产生肿瘤的方法，所述方法包括：

(a)分离原发肿瘤细胞，

(b)用细胞示踪染料标记所述肿瘤细胞，

(c)将所述细胞注射到受精后24到48小时(hpf)的斑马鱼胚胎中，

(d)将所述胚胎孵育24小时或更长时间。

2.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述肿瘤细胞是从循环肿瘤细胞(CTC)获得。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞示踪染料是荧光染料。

4.一种预测原发肿瘤侵袭或转移的可能性的方法，所述方法包括：

(a)将所述肿瘤细胞注射到斑马鱼胚胎的卵黄中，

(b)对注射有所述肿瘤细胞的胚胎进行孵育，

(c)在孵育之后，观察所述肿瘤细胞的位置，

(d)分析所述肿瘤细胞是否(i)通过所述卵黄囊侵袭所述胚胎的主体或(ii)所述细胞是否保留在所述卵黄囊中并且表现接近于非侵袭性原发肿瘤细胞。

5.一种鉴别具有较高疾病复发可能性的癌症患者的方法，所述方法包括：

(a)将原发肿瘤细胞注射到胚胎的卵黄中，

(b)对所述注射有肿瘤细胞的胚胎进行孵育，

(c)在孵育之后，观察所述肿瘤细胞的位置，

(d)如果所述肿瘤细胞进入所述胚胎的主体中，那么所述原发肿瘤侵袭和转移的倾向较高。

6.一种对癌细胞侵袭进行定量的方法，所述方法包括：

(a)从实体肿瘤分离肿瘤细胞，

(b)用细胞示踪染料标记肿瘤细胞，

(c)将所述细胞显微注射到24-48hpf斑马鱼胚胎的卵黄中，

(d)在35℃下孵育所述胚胎24小时或更长时间，

(e)在荧光显微镜下采集所述肿瘤细胞的自动荧光图像，

(f)使用图像分析软件对所述肿瘤病灶进行自动分析，以采集所述肿瘤病灶的宽度(W)和长度(L)、每个病灶的信号强度及所述图像中光点的位置，

(g)以1/2WL²计算所述病灶的体积，其中W＝宽度并且L＝长度，

(h)使用所述肿瘤病灶的位置测量所述原发肿瘤侵袭的倾向，侵袭性指数可以通过以下测量：侵袭指数(II)＝1/nΣ(在T小时的时候，所述胚胎中肿瘤病灶的数量/所述胚胎中注射的肿瘤细胞的总数)，其中n是实验中所认为的胚胎的数量，以及T是孵育时间T，并且所述II越大，则所述原发肿瘤侵袭的倾向越高，

(i)使用所述肿瘤病灶的位置，使用迁移指数测量所述侵袭的侵袭能力，所述迁移指数计算如下：迁移指数(MI)＝1/nΣ(在T小时的时候的CD/在时间T小时的时候肿瘤病灶的总数，其中CD＝肿瘤细胞行进的累积距离，n是实验中所认为的胚胎的数量，以及T是孵育时间，其中所述MI的值越高，则所述肿瘤细胞侵袭的侵袭能力越强。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述肿瘤细胞对化学试剂的反应是通过确定以下任一项在存在与不存在所述化学试剂的情况下是否不同来测量：所述肿瘤病灶的体积；所述侵袭指数；或所述迁移指数。

8.一种预测肿瘤细胞归巢的优选器官的方法，所述方法包括：

(a)从实体肿瘤分离肿瘤细胞，

(b)用细胞示踪染料标记细胞，所述细胞示踪染料具有红色荧光，如但不限于，PKH-26或DiD，

(c)将所述细胞显微注射到24-48hpfTg(Fli:EGFP)斑马鱼胚胎的卵黄中，

(d)在35℃下孵育所述胚胎24小时或更长时间，

(e)使用针对绿色和红色荧光的滤光器，在荧光显微镜下采集所述肿瘤细胞的自动荧光图像，

(f)使用图像分析软件自动分析所述肿瘤病灶，以采集所述图像中所述病灶的位置，

(g)使用所述图像分析计算所述肿瘤的归巢指数如下：归巢指数(HI)＝1/nΣ(在T小时的时候器官中病灶的总数/在时间T小时的时候肿瘤病灶的总数)，其中n是实验中所认为的胚胎的数量，以及T是孵育时间T。