[发明专利]抗-MIF抗体的细胞迁移测定方法

权利要求书

1.一种用于确定抗-MIF抗体的效价的测定方法，所述测定方法执行细胞迁移，且所述测定方法包括以下步骤：

-将能够迁移的细胞提供至装置的第一部分，其中，所述细胞包含MIF，

-将待测定的抗-(ox)MIF抗体添加至所述装置的第二部分，该第二部分被配置为与所述装置的第一部分相连接，使得允许细胞迁移和扩散，以及

-计量迁移抑制。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其中所述抗-MIF抗体是抗-oxMIF抗体，优选其中所述抗体选自于由RAB0、RAB4、RAB9、RAM0、RAM4和/或RAM9构成的组，尤其优选RAM9。

3.根据权利要求1或2所述的测定方法，其中，所述装置包括上室和下室，所述上室和下室通过具有孔的分离膜相连接，且细胞被添加至上室、抗体被添加至下室，其中优选该装置是双室的细胞迁移测定装置(改良的Boyden室测定装置)，更优选Transwell细胞迁移测定装置。

4.根据上述任一项权利要求所述的测定方法，其中所述细胞是表达(ox)MIF的细胞，优选是在细胞表面表达(ox)MIF的细胞，优选其中所述细胞是来自疾病样本的细胞，更优选其中所述细胞是单核细胞、优选人单核细胞，更优选人永生化单核细胞，最优选U937细胞，或THP-1人单核细胞或替代实施例中的大鼠NR8383单核细胞。

5.根据上述任一项权利要求所述的测定方法，其中所述细胞以细胞悬浮液的方式提供于适宜的迁移介质中以允许其迁移。

6.根据权利要求5所述的测定方法，其中所述迁移介质不包含蛋白质。

7.根据上述任一项权利要求所述的测定方法，其中所述抗体被添加在非毒性的生物缓冲液中供至第二部分，如下室，如室的下室，所述生物缓冲液具有适度弱酸及其共轭碱，优选甘氨酸缓冲液、N-取代的牛磺酸缓冲液、或磷酸盐缓冲盐水(PBS)缓冲液。

8.根据上述任一项权利要求所述的测定方法，其中添加所述抗体直至在所述测定中的最终浓度为0.01-100nM，优选为0.02至50nM，优选0.04-30nM，优选作为系列稀释。

9.根据上述任一项权利要求所述的测定方法，所述测定装置例如所述室在添加细胞和抗体后培养6-20小时，优选8-12小时，优选在约37℃下培养，其中所述细胞是U937细胞，且其中所述膜具有约5μm的孔径。

10.根据上述任一项权利要求所述的测定方法，其中对已迁移的细胞进行计数，优选上述培养步骤之后、优选在下室中对已迁移的细胞进行计数，由此可获取被测抗体的效价信息，优选通过计算半-最大抑制抗体浓度(IC₅₀值)来获取该信息。

11.根据上述任一项权利要求所述的测定方法，其中所述细胞在用于测定之前经受10至48小时，优选8-16小时，更优选10-12小时的血清饥饿。

12.根据上述任一项权利要求所述的测定方法，其中所述细胞来源于工作细胞库。

13.根据上述任一项权利要求所述的测定方法，其中，所述装置中不添加(ox)MIF。

14.一种测定试剂盒，其用于测定抗-(ox)MIF-抗体的效价，包括为了进行上述任一项或多项权利要求中所述的测定方法而必需的所有试剂，优选包含

-表达MIF的细胞

-抗体稀释缓冲液(例如，甘氨酸缓冲液)

-迁移介质，和/或

-两腔室细胞迁移系统。

15.药物或诊断组合物，其包含抗-(ox)MIF抗体，其中所述抗-(ox)MIF抗体的特征在于其已进行上述任一项权利要求中所述的效价测定。