[发明专利]具有改变的糖基化和降低的效应物功能的包含FC的多肽

说明书

相关申请

本申请要求保护2012年9月12日提交的国际申请号为PCT/EP2012/003819，名称为“抗αβTCR抗体”的申请和2013年3月11日提交的美国临时申请61/776,715，名称为“具有改变的糖基化和降低的效应物功能的包含Fc的多肽”的申请的优先权。

本申请还与2013年3月11日提交的名称为“通过糖基工程化的位点特异性抗体药物偶联”的美国临时申请61/776,724、2013年3月11日提交的名称为“高度糖基化的结合多肽”的美国临时申请61/776,710相关。前文提到的申请的内容在本文通过提述以其全文并入。

发明背景

具有降低或消除的Fc糖基化的抗体已被用于炎症和自身免疫性疾病或病症的治疗以降低与不需要的效应物功能相关的副作用或毒性(参见例如，Chan and Carter,Nat.Reviews Immunology,2010)。但是，抗体Fc结构域糖基化对于抗体结构、稳定性和功能至关重要且糖基化可导致抗体具有较差的生物物理特性。相应地，本领域对具有降低的效应物功能但仍保留理想的糖基化的Fc结构域特性的工程化的结合蛋白存在着需求。

发明概述

本公开通过提供包含具有改变的糖基化和降低的效应物功能的Fc结构域的结合多肽(例如，抗体或融合物)和任选的其药物偶联物改进了现有技术。在具体的实施方案中，所述Fc结构域包含：根据EU编号在氨基酸位点298的天冬酰胺残基；和根据EU编号在氨基酸位点300的丝氨酸或苏氨酸残基。本公开还提供编码抗原-结合多肽的核酸、用于制造这种抗原-结合多肽的重组表达载体和宿主细胞。还提供使用本文公开的抗原-结合多肽来治疗疾病的方法。

发明人还惊讶地发现本公开的结合多肽(例如，抗体)展示改变的糖基化概貌，其优势在于消除了结合多肽与Fcγ受体的结合，进而改变结合多肽的效应物功能，同时保留糖基化赋予的理想的生物物理特性。此外，在氨基酸位点298的工程化的N-连接糖基化位点也可用作用于效应物部分偶联的位点(如细胞毒性药物)。

相应地，一方面本发明提供分离的结合多肽，其包含具有改变的糖基化的Fc结构域，其中所述Fc结构域包含：根据EU编号在氨基酸位点298的天冬酰胺残基；以及根据EU编号在氨基酸位点300的丝氨酸或苏氨酸，且其中所述结合多肽由于所述改变的糖基化展示降低的效应物功能。在一个实施方案中，所述结合多肽在根据EU编号的氨基酸位点299进一步包含丙氨酸残基。在另一实施方案中，所述结合多肽在根据EU编号的氨基酸位点297进一步包含谷氨酰胺残基。在一个实施方案中，所述Fc结构域是IgG1 Fc结构域。在另一实施方案中，所述Fc结构域是人的。

在一个实施方案中，所述天冬酰胺残基的侧链与聚糖通过β-糖基酰胺连接基连接。在另一实施方案中，所述聚糖是双触角聚糖。在另一实施方案中，所述具糖是天然存在的哺乳动物糖形。

在另一实施方案中，所述结合多肽与具有天然Fc结构域的结合多肽相比具有对于Fcγ受体较低的亲和力。在一个实施方案中，所述Fcγ受体是FcγRI和/或FcγRIIIa。在另一实施方案中，所述结合多肽具有与具有天然Fc结构域的结合多肽对于FcRn受体相似的亲和力。

在另一实施方案中，所述聚糖包含具有反应性的醛基。在另一实施方案中，所述聚糖包括包含具有反应性的醛基的氧化的糖类残基。在另一实施方案中，所述氧化的糖类残基是末端唾液酸或半乳糖。

在另一实施方案中，所述聚糖与效应物部分连接。在另一实施方案中，所述效应物部分是细胞毒素。在另一实施方案中，所述细胞毒素选自列于表1的细胞毒素组。在另一实施方案中，所述效应物部分是检测剂。在另一实施方案中，所述效应物部分与聚糖的糖类残基通过肟或腙连接基连接。在另一实施方案中，所述糖类残基是聚糖的末端唾液酸或半乳糖残基。在另一实施方案中，所述效应物部分包括pH-敏感的接头、二硫化物接头、酶-敏感的接头或其它可裂解的接头部分。在另一实施方案中，所述效应物部分包括选自表2或14中描述的接头部分的组的接头部分。

在一些实施方案中，所述结合多肽是抗体或免疫粘附素。

另一方面，本发明提供了分离的结合多肽，其包含Fc结构域，其中所述Fc结构域包含：根据EU编号在氨基酸位点298的游离的天冬酰胺残基；和根据EU编号在氨基酸位点300的游离的丝氨酸或苏氨酸残基。