[发明专利]装载了肿瘤裂解物的微粒

说明书

本发明制备了包含装载了肿瘤裂解物的微粒的树突状细胞。树突状细胞递呈了肿瘤抗原来引发主要组织相容性复合体I类途径并可被用作疫苗来治疗癌症，包括眼黑色素瘤。

相关申请的交叉引用

本申请要求享有在2012年9月6日提交的申请号为61/697,498的美国临时申请、在2013年9月5日提交的申请号为14/019,025的美国申请，以及在2013年9月5日提交的申请号为14/019,007的美国申请的优先权。所有在先申请的公开内容通过提述并入本文。

发明背景

肿瘤细胞存在在某种程度上是因为其选择了一种或多种突变使得其部分或全部逃离体内的免疫监控。

在引发对肿瘤细胞的免疫应答的尝试中，之前的研究者已使用树突状细胞，其为专业的抗原呈递细胞，对免疫系统递呈肿瘤抗原。举例来说，用肽或肿瘤裂解物脉冲的树突状细胞已被用于为黑色素瘤患者接种疫苗。

然而，由于这些抗原仅由树突状细胞内吞且通常通过只诱导辅助T细胞而并不提供强免疫应答的主要组织相容性复合体(MHC)II类途径呈递，因此以之前的方式简单地向免疫系统提供肿瘤抗原并不有效。

相反地，经由MHC I类途径递呈肿瘤抗原可通过激活CD8+T细胞促成更强的抗肿瘤免疫力。之前的研究者已尝试通过使用基因转移方法由MHC I类途径递呈肿瘤抗原。然而，这些方法具有劣势，包括(1)局限的识别全部重要的肿瘤特异性抗原的能力，(2)局限的对特异性肿瘤抗原基因定位的能力，(3)只有一种或少数的已知肿瘤抗原基因可以被引入树突状细胞以及(4)所述方法费时且繁琐。

发明概述

一些实施方案涉及分离的树突状细胞，其包含基本上由(i)微粒和(ii)微粒内装载的肿瘤裂解物所组成的吞噬组分。在特定的实施方案中，所述肿瘤裂解物以约200μg至约500μg的量存在。在特定的实施方案中，所述肿瘤裂解物以约200μg的量存在。

在一些实施方案中，所述肿瘤裂解物是选自癌症的裂解物，所述癌症选自下组：乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、髓母细胞瘤、神经母细胞瘤、肾母细胞瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、肝癌、胰腺癌、黑色素瘤、前列腺癌和眼黑色素瘤。

在一些实施方案中，所述微粒是酵母细胞壁微粒。在一些实施方案中，所述树突状细胞是已分离不超过8天的未成熟细胞。

另一实施方案涉及疫苗，其包含前文所述的分离的树突状细胞。

一些实施方案涉及用于产生分离的包含装载了肿瘤裂解物的微粒的树突状细胞的方法，其包括：(i)将所述肿瘤裂解物装载入微粒来产生装载了肿瘤裂解物的微粒；(ii)冻干所述装载了肿瘤裂解物的微粒；以及(iii)将所述装载了肿瘤裂解物的微粒与树突状细胞共同孵育，其中所述孵育引起所述树突状细胞吞噬所述装载了肿瘤裂解物的微粒。

在特定的实施方案中，前文所述方法进一步包括(a)在溶液中重悬所述装载了肿瘤裂解物的微粒以及(b)在步骤(iii)之前冻干所述重悬溶液。在特定的实施方案中，所述肿瘤裂解物通过冷冻和融化所述肿瘤生成。在特定的实施方案中，前文所述方法进一步包括重复所述冷冻和融化步骤。在特定的实施方案中，前文所述方法进一步包括在-150℃冷冻保存所述肿瘤裂解物。

在特定的实施方案中，步骤(iii)包括：(a)将肿瘤裂解物加入酵母细胞壁微粒，(b)孵育所述酵母细胞壁微粒，(c)冻干所述酵母细胞壁微粒以及(d)洗涤所述酵母细胞壁，其中重复步骤(b)-(c)至少一次且在重复步骤(b)之前伴随将水加入所述酵母细胞微粒的步骤。

在特定的实施方案中，步骤(iii)包括：(a)将装载了肿瘤裂解物的微粒与树突状细胞以约100:1的比例接触，(b)将所述装载了肿瘤裂解物的微粒与所述树突状细胞孵育1至2小时以及(c)收集所述树突状细胞并洗涤所述细胞。