[发明专利]用于生产重组蛋白质的方法

权利要求书

1.一种使用NHEJ蛋白质或其功能片段、或者编码它们的多核苷酸转染的宿主细胞，其中所述的多核苷酸序列处于合适的启动子的控制之下，并且所述的宿主细胞还被表达盒转染，其中所述的表达盒包含编码至少一种目的蛋白质的多核苷酸(DNA或RNA)序列。

2.一种使用编码NHEJ蛋白质或其功能片段的多核苷酸序列转染的宿主细胞，其中所述的多核苷酸序列处于合适的启动子的控制之下，并且所述的宿主细胞还被表达盒转染，其中所述的表达盒包含编码至少一种目的蛋白质的多核苷酸序列。

3.一种根据权利要求1或权利要求2所述的宿主细胞，其中所述的NHEJ蛋白质为Ku70或Ku80，或者其功能片段。

4.一种根据权利要求1至3的任意一项所述的宿主细胞，其被2种或更多种NHEJ蛋白质或其功能片段、或者编码它们的一种或多种多核苷酸所转染。

5.一种根据权利要求4所述的宿主细胞，其中所述的宿主细胞被Ku70和Ku80或其功能片段、或者编码它们的一种或多种多核苷酸所转染。

6.一种根据权利要求1至5的任意一项所述的宿主细胞，其中所述的细胞为原核细胞、真核细胞或酵母菌。

7.一种根据权利要求6所述的宿主细胞，其中所述的宿主细胞为CHO细胞。

8.一种根据权利要求1至7的任意一项所述的宿主细胞，其中所述的目的蛋白质为抗体或其结合片段。

9.一种根据权利要求1至8的任意一项所述的宿主细胞，其中所述的目的蛋白质为导致位点特异性突变的蛋白质，例如锌指核酸酶、大范围核酸酶或其功能片段。

10.一种根据权利要求1至9的任意一项所述的宿主细胞，其中所述的多核苷酸为DNA。

11.一种根据权利要求1至9的任意一项所述的宿主细胞，其中所述的多核苷酸为RNA。

12.一种根据权利要求1至11的任意一项所述的宿主细胞，其中所述的编码NHEJ蛋白质的多核苷酸序列为质粒形式。

13.一种根据权利要求1至12的任意一项所述的宿主细胞，其中所述的编码目的蛋白质的多核苷酸序列为质粒形式。

14.一种根据权利要求1至12的任意一项所述的宿主细胞，其中所述的编码目的蛋白质的多核苷酸序列为线性DNA或RNA形式。

15.一种根据权利要求1至10、12和13的任意一项所述的宿主细胞，其中所述的编码目的蛋白质的DNA序列以质粒形式提供，并且其中所述的质粒进一步包含编码Ku70、Ku80、Ku70和Ku80的组合或其功能片段的DNA序列。

16.一种根据权利要求1至15的任意一项所述的宿主细胞，其中所述的启动子为强病毒启动子。

17.一种根据权利要求16所述的宿主细胞，其中所述的启动子为CMV启动子。

18.一种根据权利要求1至17的任意一项所述的宿主细胞，其中所述的NHEJ蛋白质或其功能片段为人类、仓鼠、小鼠、酵母菌或其他序列来源。

19.一种根据权利要求1至18的任意一项所述的宿主细胞，其中所述的编码NHEJ蛋白质或其功能片段的多核苷酸序列、和/或所述的包含编码目的蛋白质的DNA序列的表达盒进一步包含选择标记物。

20.一种根据权利要求19所述的宿主细胞，其中所述的选择标记物为谷氨酰胺合成酶标记物。

21.一种根据权利要求1至20的任意一项所述的宿主细胞，其中所述的包含编码目的蛋白质的DNA序列的表达盒稳定地整合至所述的细胞的基因组中。

22.一种根据权利要求1至21的任意一项所述的宿主细胞，其中所述的编码NHEJ蛋白质或其功能片段的多核苷酸序列瞬间转染至所述的细胞中。

23.一种根据权利要求1至22的任意一项所述的宿主细胞，其中所述的编码NHEJ蛋白质或其功能片段的多核苷酸序列稳定地转染至所述的细胞中。

24.一种包含编码Ku70、Ku80、其组合或其功能片段的序列的质粒DNA，其中所述的DNA序列处于合适的启动子的控制之下。