[发明专利]用于识别前列腺癌和前列腺肥大的方法及试剂盒

说明书

【技术领域】

本发明涉及，用于识别前列腺癌和前列腺肥大的方法及试剂盒。

【背景技术】

公知前列腺癌(prostatecarcinoma：以下简称为“Pca”)是男性的主要的死亡原因，前列腺特异抗原(prostate-specific antigen：以下简称为“PSA”)被认为对Pca的最重要的肿瘤标志物(非专利文献1)。PSA是约34kDa的糖蛋白，糖链占其约8％。已经在多种文献中记载了对Pca的早期诊断的血清PSA测试的有用性，但在罹患Pca的男性和罹患前列腺肥大(benign prostate hyperplasia：以下简称为“BPH”)的男性之间有被称为灰色区(grayzone)的既说不上是Pca也说不上是BPH的区域(非专利文献2)。从而至今实施用于正确地区别2种病变的尝试，例如，将PSA密度、PSA梯度、游离PSA/总PSA的比等作为指标的尝试。但是，这样的方法难以正确地区别2种病变。因此，现在的血清PSA测试对Pca不是特异性的、且无使灵敏度和特异性一同满足的适宜的截止值成为世界性的问题。

基于这样的背景、作为本发明人的大山等的组将从精囊液纯化的PSA用N-糖苷酶F处理，切出PSA的N型糖链，由基质关联激光解吸/电离飞行时间(MALDITOF)质谱(MS)进行解析，作为PSA的糖链鉴定19种，得知PSA的糖链非常地富多样性(非专利文献3)。其以前，Stamey等的组报告，作为PSA的糖链，仅表达以双链在末端，唾液酸以α(2,6)键与半乳糖结合的N型糖链(非专利文献4)、由大山等的组明了，末端的唾液酸不仅通过α(2,6)键、还存在约10％通过α(2,3)键与半乳糖结合的。其后，大山等的组在不仅含糖链、还含PSA的肽序列的状态下由MS-MS解析PSA而得知，PSA的N型糖链的末端唾液酸残基，伴随癌化，相比通过α(2,6)键，通过α(2,3)键与半乳糖结合增加(非专利文献5)。

鉴于以上的见解，认为以有末端唾液酸残基通过α(2,3)键与半乳糖结合的N型糖链的PSA量作为指标识别Pca和BPH是可能的，实际上，由作为本发明人的大山在专利文献1中提议的使用特异性地识别末端唾液酸残基通过α(2,3)键与半乳糖结合的糖链的朝鲜槐凝集素的亲和性层析，确认可识别Pca和BPH。但是，由使用朝鲜槐凝集素的亲和性层析识别Pca和BPH的方法作为与至今提议的方法完全不同的方法被关注，由于有末端唾液酸残基通过α(2,3)键与半乳糖结合的N型糖链的PSA量是总PSA量的仅1～2％，是极微量，为了进行精度高的识别，有作为分析样品大量(10ml左右)需要血清的问题。另外，使用的朝鲜槐凝集素由于是自天然物的提取物，也有确认在批间的品质的偏差等的问题。

【现有技术文献】

【专利文献】

专利文献1：专利第4514919号公报

【非专利文献】

非专利文献1：StameyTA，YangN，HayAR，etal.，N.Engl.J.Med.1987；317：909-916

非专利文献2：CatalonaWJ，etal.，JAMA1998；279：1542-1547

非专利文献3：OhyamaC，etal.，Glycobiology，2004；14：671-679

非专利文献4：BelangerA，VanHalbeekH，GravuxesHC，etal.Prostate，1995；27：187-197

非专利文献5：TajiriM，OhyamaC，WadaY，Glycobiology，2008；18：2-8

【发明内容】

【发明要解决的技术课题】

从而本发明以提供以少的分析样品高灵敏度地再现性良好地识别Pca和BPH的方法作为目的。

【解决课题的技术方案】

本发明人鉴于上述的方面进行锐意探讨的结果发现，通过使用特异性地识别末端唾液酸残基通过α(2,3)键与半乳糖结合的糖链的单克隆抗体的免疫学测定法测定分析样品中含的有末端唾液酸残基通过α(2,3)键与半乳糖结合的N型糖链的游离PSA量，可以少的分析样品高灵敏度地再现性良好地识别Pca和BPH。