[发明专利]尿液外泌小体mRNA和使用其检测糖尿病型肾病的方法

说明书

相关案件

本申请要求2012年10月5日提交的美国临时申请系列号61/710,627的好处，其全部公开内容通过引用并入本文。

背景

技术领域

本公开大体上涉及与糖尿病型肾病相关的各种生物标记的鉴定。数个实施方式涉及糖尿病型肾病的诊断，并且，更具体地，本公开涉及从源自尿液的外泌小体分离的mRNA的鉴定和使用，以及它们在糖尿病型肾病的鉴定和持续监测中的应用。

相关技术的描述

一般来说，肾的功能在于过滤血液中的各种代谢废物和过多的水。每天，成年人的肾过滤约200夸脱的血液，导致产生并排泄约2夸脱的废物和额外的水。肾的功能单位是肾单位，并且每个肾包括约1百万个肾单位。每个肾单位内是肾小球，其用作过滤装置，其保留血流中的正常蛋白质和/或细胞，并且允许过多的水和废物穿过而被剩余的肾单位处理(例如，浓缩或稀释)。尽管一些肾功能的丧失是可以忍受的-许多个体可用仅仅一个肾过正常生活-但是在许多情况下肾功能的下降是由于进行性疾病或损伤。在极端情况下，肾功能的进行性丧失导致需要肾替代疗法，比如透析或甚至肾移植。肾功能丧失的两个最常见的原因是糖尿病和高血压。根据美国糖尿病协会的最新数据，超过8％的美国人口是患糖尿病的。由于糖尿病造成的晚期肾病，超过200,000人依靠长期透析或依靠肾移植生活。这不仅仅给患者本人而且给他们的家庭和医疗保健系统造成巨大的成本。

发明内容

在数个实施方式中，提供了鉴定受试者可能发展成糖尿病型肾病或目前遭受糖尿病型肾病的方法，该方法包括获得来自受试者的尿液样品，其中所述样品包括与RNA结合的囊泡，从所述样品分离所述囊泡，使所述囊泡裂解以释放囊泡结合的RNA，其中所述囊泡结合的RNA包括与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA，其中与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA选自由PPARGC1A、SMAD1、UMOD、NRF2、SLC12A1和CD24组成的组，量化与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA，将来自所述受试者的与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA的量与来自具有正常肾功能个体的相应RNA的数量进行比较，当所述受试者的与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA的数量和具有正常肾功能的个体中RNA的数量之间有差异时，鉴定受试者可能发展或目前遭受糖尿病型肾病。在数个实施方式中，通过下述方法进行量化，所述方法包括使来自所述样品的RNA接触逆转录酶，以产生互补DNA(cDNA)，和(ii)使cDNA接触对PPARGC1A、SMAD1、UMOD、NRF2、SLC12A1和CD24之一特异性的正义引物和反义引物以及DNA聚合酶，以产生扩增的DNA。其后，可量化所述mRNA的表达水平(使用扩增的DNA作为替代品)。

在数个实施方式中，所述方法进一步包括基于出现的结果向受试者施用疗法。例如，可单独或结合膳食、训练或生活方式的改变而施用药物疗法。另外，也可施用透析。在一些实施方式中，进行肾移植。

也提供了鉴定受试者遭受糖尿病型肾病的方法，包括获得来自受试者的尿液样品，其中所述样品包括与RNA结合的囊泡，从所述样品分离所述囊泡，使所述囊泡裂解以释放所述囊泡结合的RNA，其中所述囊泡结合的RNA包括与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA，其中所述与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA选自由PPARGC1A、SMAD1、UMOD、NRF2、SLC12A1和CD24组成的组，量化所述与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA，并将来自所述受试者的所述与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA的量与来自具有正常肾功能个体的相应RNA的数量进行比较，其中所述受试者和所述个体之间与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA的数量之间的差异指示所述受试者遭受糖尿病型肾病。