[发明专利]尿液外泌小体mRNA和使用其检测糖尿病型肾病的方法

权利要求书

1.一种鉴定受试者可能发展成糖尿病型肾病或目前遭受糖尿病型肾病的方法，包括：

获得来自受试者的尿液样品，

其中所述样品包括与RNA结合的囊泡；

从所述样品分离囊泡；

裂解所述囊泡，以释放所述囊泡结合的RNA，其中所述囊泡结合的RNA包括与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA，

其中与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的所述RNA选自由PPARGC1A、SMAD1、UMOD、NRF2、SLC12A1和CD24组成的组；

通过下述方法量化与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的所述RNA，所述方法包括：

(i)使来自所述样品的RNA接触逆转录酶，以产生互补DNA(cDNA)，和

(ii)使所述cDNA接触对PPARGC1A、SMAD1、UMOD、NRF2、SLC12A1和CD24之一特异性的正义引物和反义引物以及DNA聚合酶，以产生扩增的DNA；

将量化后的来自所述样品的与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA的数量与来自具有正常肾功能个体的相应RNA的数量进行比较；和

当所述受试者的与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的所述RNA的数量和具有正常肾功能的个体中所述RNA的所述数量之间具有差异时，鉴定受试者可能发展成糖尿病型肾病或目前遭受糖尿病型肾病。

2.根据权利要求1所述的方法，其中与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA的所述数量的所述差异与糖尿病型肾病的一个或多个非分子指示剂相关联。

3.根据权利要求1所述的方法，其中与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的所述RNA选自由PPARGC1A、SMAD1、UMOD和SLC12A1组成的组。

4.根据权利要求1所述的方法，其中从所述样品分离所述囊泡包括对所述尿液进行过滤。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述过滤是在过滤器上捕获所述囊泡。

6.根据权利要求5所述的方法，其中在所述囊泡被捕获在所述过滤器上的情况下进行所述裂解。

7.根据权利要求1所述的方法，进一步包括离心所述样品以去除细胞碎片。

8.根据权利要求7所述的方法，其中在分离所述囊泡之前进行所述离心。

9.根据权利要求7所述的方法，其中浓缩所述囊泡进一步包括过滤所述离心的尿液的上清液。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述糖尿病型肾病是由于I型或II型糖尿病引起的。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述I型或II型糖尿病还未被诊断。

12.根据权利要求1所述的方法，其中与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的所述RNA包括poly(A)+RNA。

13.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法用于筛查多个受试者，以测定他们发展糖尿病型肾病的可能性和/或检测早期糖尿病型肾病。

14.一种鉴定受试者遭受糖尿病型肾病的方法，包括：

获得来自受试者的尿液样品，其中所述样品包括与RNA结合的囊泡；

从所述样品分离所述囊泡；

裂解所述囊泡，以释放所述囊泡结合的RNA，其中所述囊泡结合的RNA包括与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA，

其中与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的所述RNA选自由PPARGC1A、SMAD1、UMOD、NRF2、SLC12A1和CD24组成的组；

通过使用下述方法量化与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的所述RNA，所述方法选自由逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、实时RT-PCR、RNA印迹、荧光激活细胞分选、ELISA、质谱分析和蛋白质印迹组成的组；和

将来自所述受试者的与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的所述RNA的数量与来自具有正常肾功能个体的相应RNA的数量进行比较，其中所述受试者和所述个体之间与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的所述RNA的数量的差异指示受试者遭受糖尿病型肾病。