[发明专利]线粒体毒性检测

权利要求书

1.一种方法，包括：

i)使分离自人血液样品的含有活线粒体的细胞样品进行高分辨率呼吸测量，

ii)使所述细胞样品与提高线粒体内膜对质子的渗透性的物质接触，

iii)加入包含介质中的检测物质的检测样品，

iv)比较加入所述检测样品之前和之后的耗氧量并且比较所述检测样品的耗氧量与所述介质的对照样品的耗氧量，其中，所述耗氧量下降表明对所述线粒体的负面作用，

v)使来自iii)的样品与线粒体复合物I-功能抑制剂接触，

和

vi)使来自v)的样品与线粒体复合物III-功能抑制剂接触。

2.一种方法，包括：

i)使分离自人血液样品的含有活线粒体的细胞样品进行高分辨率呼吸测量，其中，所述细胞样品来自进行临床研究或进行治疗方案的个体，

ii)使所述细胞样品与提高线粒体内膜对质子的渗透性的物质接触，

iii)比较来自进行临床研究或治疗方案的所述个体的样品的耗氧量与对照样品的耗氧量，其中，耗氧量下降表明对所述线粒体的负面作用，

iv)使来自iii)的所述样品与线粒体复合物I-功能抑制剂接触，

和

v)使来自iv)的所述样品与线粒体复合物III-功能抑制剂接触。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在37℃的恒定温度下，在400-25μM O₂范围的氧浓度下进行所述高分辨率呼吸测量。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，加入提高线粒体内膜对质子的渗透性的物质以获得存在于所述样品中的线粒体的电子传递系统的最大容量。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，提高线粒体内膜对质子的渗透性的所述物质选自羰基氰对-(三氟甲氧基)苯腙(FCCP)、羰基氰间-氯苯腙(CCCP)、2,4-二硝基苯酚(DNP)和其他质子载体、和它们的混合物。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，以0.1至10μM，如0.5至5μM、1至3μM或约2μM范围的浓度加入提高线粒体内膜对质子的渗透性的所述物质。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，提高线粒体内膜对质子的渗透性的所述物质是FCCP。

8.根据权利要求1、3至6中任一项所述的方法，其中，所述介质是有机溶剂，如，例如乙醇、异丙醇、甲醇、DMSO(二甲基亚砜)、DMF(二甲基甲酰胺)或DMA(二甲基乙酰胺)。

9.根据权利要求1、3至8中任一项所述的方法，其中，所述检测样品是液体形式并且所述检测样品包含已知浓度的所述检测物质。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，以逐渐升高的浓度加入所述检测样品。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，逐步加入检测样品导致所述检测样品的终浓度为1μM至10mM。

12.根据权利要求1、3至11中任一项所述的方法，其中，iii)中的所述对照样品与所述检测样品相同，但不具有检测样品的内含物。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，加入所述线粒体复合物I-功能抑制剂以表明依赖于复合物II底物氧化的细胞呼吸。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，以0.1至10μM，如0.5至5μM、1至3μM或约2μM范围的浓度加入所述线粒体复合物I-功能抑制剂。

15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述线粒体复合物I-功能抑制剂是鱼藤酮。

16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，加入所述线粒体复合物III-功能抑制剂以测定任何非线粒体耗氧活性，如所述样品的自动氧化，

17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，以约0.1至10μg/ml，如约0.5至5μg/ml、约0.75至2μg/ml或1μg/ml的终浓度加入所述线粒体复合物III-功能抑制剂。

18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述线粒体复合物III-功能抑制剂是抗霉素A。