[发明专利]用于对来自体液的循环上皮肿瘤细胞亚群体进行培养的方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于对来自人或动物体液的循环上皮肿瘤细胞亚群体进行培养的方法。所述动物可以是哺乳动物。

背景技术

Dontu，G.等，Genes&Development 17，2003，第1253-1270页公开了对来自乳房组织的人上皮细胞进行体外培养的方法。通过将乳房组织机械解离或酶解离制备人乳腺上皮细胞的单细胞悬液，并在不允许贴附至基底的条件下培养所述悬液而生成所述细胞。在该方法中，仅有少量细胞群体在悬液中增殖，所述细胞被称为乳腺球(mammospheres)。

Lu，J.等，Int.J.Cancer 126，2010，第669-683页公开了首先借助Ficoll密度梯度离心富集来自乳腺癌患者外周血的细胞，将由此获得的单核细胞接种于胶原贴附基质上，并在CO₂细胞培养箱中在细胞培养介质中将它们孵育12小时。仅对能够在该时间内贴附的细胞进行后续的进一步培养，而将非贴附细胞和旧培养介质去除。通过加入新鲜细胞培养介质对贴附细胞进行培养，随后每3天更换新鲜细胞培养介质。在该程序中，培养物中细胞的数量和大小随时间增加。20天后，出现具有上皮形态的广泛铺展的细胞。

DE 10 2009 047 146 A1公开了用于预测患者中的实体上皮肿瘤诱导的肿瘤疾病对治疗措施(therapeutic measure)的应答的方法。在该方法中，将来自患者体液的各上皮肿瘤细胞收集至细胞培养介质中。所述细胞培养介质优选不含加入的生长因子并且不含加入的含有生长因子的血清。将来自含有肿瘤细胞的细胞培养介质样品中的肿瘤细胞暴露于所述治疗措施，而不对来自含有肿瘤细胞的细胞培养介质的等同对照样品中的肿瘤细胞进行处理。随后，对于样品和对照样品，均确定濒死上皮肿瘤细胞和死亡上皮肿瘤细胞相对于上皮肿瘤细胞总数的比例，由此，将上皮肿瘤细胞与治疗措施相关的死亡率作为所述应答的量度。在所述治疗措施与确定濒死上皮肿瘤细胞和死亡上皮肿瘤细胞相对于上皮肿瘤细胞总数的比例之间可存在数小时至数天的时间段。在该时间段内，将肿瘤细胞维持在惯用的细胞培养条件下，这允许肿瘤细胞在无治疗措施的情况下在细胞培养介质中存活。并未公开肿瘤细胞在这些条件下增殖。

发明内容

本发明的一个目的在于提供用于对来自患者体液的细胞进行培养的替代方法，所述患者罹患由上皮肿瘤导致的肿瘤疾病。所培养的细胞将能够表征该肿瘤疾病。此外，还提供了利用所述方法所培养的细胞的用途以及所述肿瘤细胞的治疗用途。

该目的由权利要求1、8和13的特征实现。有用的实施方式由权利要求2-7和9-12的特征披露。

本发明提供了用于对来自体液的循环上皮肿瘤细胞亚群体进行培养的方法，所述体液来自罹患(affected by)上皮肿瘤的人或动物，更具体而言为哺乳动物。在所述方法中，将存在于体液中且包含至少一个细胞核的各细胞从所述体液中分离，并悬浮(即，避免细胞贴附至基底)培养至少24小时，更具体而言至少2天，更具体而言至少3天，更具体而言至少4天，更具体而言至少5天，更具体而言至少6天，更具体而言至少7天，从而形成球状体(spheroids)。在培养以形成球状体时，至少将细胞培养至通过增殖形成球状体(任选地添加至少一种生长因子)。此处，将上皮肿瘤细胞理解为特别意指具有上皮细胞粘附分子(EpCAM，CD326)或相应的动物性分子的肿瘤细胞。在该上下文中，所述细胞可以是例如癌(carcinoma)细胞或肉瘤细胞。

不含细胞核的细胞一般为可能存在于体液中的红细胞。这些红细胞还可存在于已分离的细胞中。如果体液中存在完整的红细胞，可将包含至少一个细胞核的各细胞与完整的红细胞分离，更具体而言通过裂解所述完整的红细胞来进行所述分离。与完整红细胞的分离可在将包含至少一个细胞核的各细胞从体液分离之前、之中或之后进行。

悬浮培养是在不允许贴附至基底的条件下进行的培养程序。可通过不使用包被有胶原或以一些其它方式促进细胞贴附的细胞培养器皿进行培养，和/或定期或不断地将含有肿瘤细胞的悬液移出，来实现所述悬浮培养。促进细胞贴附的细胞培养器皿可以例如由具有表面电荷的塑料构成。当细胞培养器皿为包被有硅酮或硅烷的细胞培养器皿时，也可避免细胞贴附。

与从Lu等知晓的培养程序不同，悬浮培养在不需要为增殖而贴附于表面的情况下诱导或允许体液中存在的循环上皮肿瘤细胞亚群体增殖。