[发明专利]用于对来自体液的循环上皮肿瘤细胞亚群体进行培养的方法

权利要求书

1.一种用于对来自体液的循环上皮肿瘤细胞亚群体进行培养的方法，所述体液来自罹患上皮肿瘤的人或动物，其中，将存在于所述体液中且包含至少一个细胞核的各细胞从所述体液中分离，并悬浮培养至少24小时以形成球状体。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述体液是淋巴液或血液，更具体而言为外周血。

3.如在前权利要求中任一项所述的方法，其中，所述体液包含完整的红细胞；并将所述包含至少一个细胞核的各细胞与所述完整的红细胞分离，更具体而言通过裂解所述完整的红细胞进行所述分离。

4.如在前权利要求中任一项所述的方法，其中，将存在于所述体液中且包含至少一个细胞核的各细胞从所述体液中分离，而不对这些细胞中的特定细胞进行选择，将分离的细胞转移至细胞培养介质，并在细胞培养条件下维持在细胞培养介质中。

5.如权利要求4所述的方法，其中，所述细胞培养条件包括：在35.5℃-37.5℃范围内的温度、更具体而言在36.8℃-37.1℃范围内的温度、更具体而言37℃的温度；以及包含4.5％-5.5％CO₂的气氛、更具体而言包含5％CO₂的气氛。

6.如权利要求4或5所述的方法，其中，多次或定期地将新鲜细胞培养介质加入至所述细胞培养介质；或者其中，多次或定期地将所述细胞转移至新鲜细胞培养介质。

7.如在前权利要求中任一项所述的方法，其中，将在培养中已形成所述球状体的肿瘤细胞从所培养的肿瘤细胞中分离。

8.根据如权利要求7所述的方法培养并存在于球状体中的肿瘤细胞在检查所述球状体中存在的所述肿瘤细胞的自我更新能力和/或所述球状体中产生的祖细胞的自我更新能力方面的用途；和/或测试所述球状体中的所述肿瘤细胞对用于治疗在人或动物中由循环上皮肿瘤细胞的产生而引起的肿瘤疾病的药剂或治疗措施的敏感性方面的用途。

9.如权利要求8所述的用途，其中，使用针对人上皮抗原EpCAM(上皮细胞粘附分子)的抗体对存在于所述球状体中的所述肿瘤细胞进行荧光标记，随后使用图像分析方法进行分析。

10.如权利要求9所述的用途，其中，用能够被荧光检测、且特异或优先对死细胞进行染色的物质对存在于所述球状体中的所述肿瘤细胞进行染色，所述物质更具体而言为碘化丙啶。

11.如权利要求9或10所述的用途，其中，标记、测定和/或染色在Ca²⁺螯合剂存在的情况下进行，所述Ca²⁺螯合剂更具体而言为EDTA或EGTA。

12.如权利要求8-11中任一项所述的用途，其中，所述治疗措施为物理措施，所述物理措施更具体而言为辐射处理或过热处理；或者，所述治疗措施为药物措施，所述药物措施更具体而言为化疗、激素治疗或抗体治疗。

13.用于在人或动物中对肿瘤疾病进行免疫治疗的根据如权利要求7所述的方法培养的形成球状体的肿瘤细胞。