[发明专利]用于检测或测定病毒载体组合物对真核细胞及其所用生物标记的影响的方法有效
| 申请号： | 201380049975.7 | 申请日： | 2013-07-26 |
| 公开（公告）号： | CN104797717B | 公开（公告）日： | 2018-06-05 |
| 发明（设计）人： | P.布耶;R.加永;A.伊谢 | 申请（专利权）人： | 韦克塔里斯公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6876 | 分类号： | C12Q1/6876 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 初明明;梁谋 |
| 地址： | 法国*** | 国省代码： | 法国;FR |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 病毒载体 生物标记 表达水平 靶细胞 真核细胞 体细胞 转基因 转入 响应 引入 检测 | ||
1.用于评价将转基因转入真核无限增殖化细胞的逆转录病毒载体组合物的质量的方法，所述方法包括：(a) 在尚未与逆转录病毒载体组合物接触的真核无限增殖化细胞中测定选自以下的至少一种生物标记的表达水平：CXCL2和EREG；(b) 在与高MOI的所述逆转录病毒载体组合物接触后测定真核无限增殖化细胞中所述至少一种生物标记的表达水平，其中高MOI对应于对于非容许性的细胞至少3倍最佳MOI，或对于容许性的细胞至少4倍佳MOI；和(c) 比较(b)中的所述生物标记表达和(a)中的生物标记表达，其中与(a)相比，(b)中的生物标记表达水平显著上调表明逆转录病毒载体组合物的质量不足。
2.权利要求1的方法，其中与(a)相比，在高MOI的显著上调是两倍上调。
3.权利要求1-2中任一项的方法，进一步包括以下步骤：(d) 在尚未与逆转录病毒载体组合物接触的真核无限增殖化细胞中测定选自以下的至少一种生物标记的表达水平：ASPM、AURKB、CENPA、CENPF、CKS1B、E2F8、ERCC6L、FAM83D、KIFC1、MKI67、NEK2、NUSAP1、OIP5、PRC1、RRM2、SGOL1、SPC25、TOP2A和TTK；(e) 在与所述逆转录病毒载体组合物接触后测定真核无限增殖化细胞中所述至少一种生物标记的表达水平；和(f) 比较(e)中的所述生物标记表达和(d)中的生物标记表达，其中与(d)相比，(e)中的生物标记表达水平的显著下调表明逆转录病毒载体组合物的质量不足。
4.权利要求3的方法，其中与(d)相比，在最佳MOI的显著下调是1.5倍下调。
5.权利要求1-2中任一项的方法，进一步包括以下步骤：(g) 在与对照病毒载体组合物接触后测定真核无限增殖化细胞中选自以下的至少一种生物标记的表达水平：CXCL2和EREG；和(h) 比较(g)中的所述生物标记表达与(a)中的生物标记表达，其中与(a)相比，检测到(g)中的生物标记无显著差异表达。
6.权利要求3的方法，进一步包括以下步骤：(j) 在与对照病毒载体组合物接触后测定真核无限增殖化细胞中选自以下的至少一种生物标记的表达水平：ASPM、AURKB、CENPA、CENPF、CKS1B、E2F8、ERCC6L、FAM83D、KIFC1、MKI67、NEK2、NUSAP1、OIP5、PRC1、RRM2、SGOL1、SPC25、TOP2A和TTK；和(k) 比较(j)中的所述生物标记表达与(d)中的生物标记表达，其中与(d)相比，检测到(j)中的生物标记表达水平的潜在下调。
7.权利要求6的方法，其中与(d)相比的(j)中的生物标记表达水平的潜在下调，比在高MOI时与(d)相比的(e)中的生物标记表达水平的下调小至少1.5倍。
8.权利要求5的方法，包括逆转录病毒载体组合物和对照病毒载体组合物的预先的滴定步骤。
9.权利要求1-2中任一项的方法，其中在细胞达到汇集前进行生物标记表达水平的测定。
10.权利要求1-2中任一项的方法，其中真核无限增殖化细胞是真核细胞并且被慢病毒载体组合物转导。
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