[发明专利]用于治疗肌肉萎缩症患者的寡核苷酸

说明书

本发明涉及寡核苷酸和包含所述寡核苷酸的药物组合物。该寡核苷酸能结合到来自抗肌萎缩蛋白前体mRNA的第一外显子的区域和相同前体mRNA内的第二外显子的区域，其中所述第二外显子的所述区域具有与所述第一外显子的所述区域至少50％的同一性，其中所述寡核苷酸适用于所述前体mRNA的所述第一外显子和第二外显子、并且优选两者之间外显子的全部延伸的跳读。

技术领域

本发明涉及人类遗传学领域，更具体地涉及用于设计单一寡核苷酸的方法，该单一寡核苷酸优选地能够诱导前体mRNA(pre-mRNA)的两个或更多个外显子的跳读(略读，skipping)。本发明进一步提供所述寡核苷酸、包含所述寡核苷酸的药物组合物和如本文所确定的所述寡核苷酸的应用。

背景技术

寡核苷酸在医药中脱颖而出用于治疗遗传疾病如肌肉萎缩症。肌肉萎缩症(Muscular dystrophy，MD)是指特征在于进行性无力和骨骼肌变性的遗传疾病。杜兴氏肌肉萎缩症(Duchenne muscular dystrophy，DMD)和贝克氏肌肉萎缩症(Becker musculardystrophy，BMD)是最常见的儿童期形式的肌肉萎缩症，并且在本文中用于说明本发明。DMD是严重的、致命的神经肌肉病症，其导致在12岁以前对轮椅支架的依赖性，并且DMD患者在30岁以前常死于呼吸或心脏衰竭。

DMD由DMD基因中的突变引起；主要是移码缺失或一个或多个外显子重复(duplication)，小核苷酸插入或缺失，或由无义点突变引起，其通常导致功能性抗肌萎缩蛋白(肌营养不良蛋白，dystrophin)的缺乏。在过去十年期间，为了恢复DMD转录本的断裂的阅读框，特异性诱导的剪接的修饰已新兴为用于杜兴氏肌肉萎缩症(DMD)的有希望的治疗(van Ommen G.J.等人，Yokota T.等人，van Deutekom等人，Goemans N.M.等人)。使用序列特异性反义寡核苷酸(AON)，其靶向侧接(侧翼，flank)或含有突变的特定外显子且干扰它的剪接信号，该外显子的跳读可以在DMD前体mRNA的加工过程中被诱导。尽管得到截短的转录本，但恢复了开放阅读框并且引入了蛋白质，其类似于在通常较温和贝克氏肌肉萎缩症患者中发现的那些。AON诱导的外显子跳读提供特定突变，和因此用于DMD患者和特别严重BMD患者的潜在个性化治疗方法。由于大多数突变紧紧环绕DMD基因中的外显子45至55，在其区域中的一个特定外显子的跳读可以用于具有各种突变患者亚群的治疗。外显子51的跳读影响最大的患者亚群(约13％)，包括具有外显子45至50、48至50、50或52的缺失的那些患者。对于一些突变，需要一个以上外显子的跳读恢复开放阅读框。例如，对于具有DMD基因中外显子46至外显子50缺失的DMD患者，仅跳读外显子45和51将是矫正性的。为了治疗这些患者，需要给予两种寡核苷酸、一种靶向外显子45而另一种靶向外显子51。已广泛研究在混合体(cocktail)中或在病毒递送的基因构建体中通过使用AON的组合使两个或更多个连续外显子跳读的可行性(Aartsma-Rus A.等人,2004；Béroud C.等人；Van Vliet L.等人；Yokota T.等人；Goyenvalle A.等人)。多外显子跳读将适用于组合的患者亚群，允许模拟已知与相对温和表型相关的缺失，并且将提供工具来解决DMD基因中热点缺失区域以外的稀有突变。对于开发包含多种寡核苷酸的药物的缺点是其药品监管当局可以把不同序列的寡核苷酸作为不同的药物，每个都需要证明稳定的生产、毒性和临床测试。因此，需要能够诱导至少两个外显子的跳读以促进治疗DMD患者的组合子群的单分子化合物。

具体实施方式

本发明提供用于设计单一寡核苷酸的方法，其中所述寡核苷酸能够结合到第一外显子的区域并结合到相同前体mRNA内的第二外显子的区域，其中所述第二外显子的所述区域具有与所述第一外显子的所述区域具有至少50％的同一性。通过所述方法获得的寡核苷酸优选地能够诱导所述前体mRNA的所述第一外显子和所述第二外显子的跳读。优选地，也诱导另外的一个或多个外显子的跳读，其中所述另外的一个或多个外显子优选地位于所述第一和所述第二外显子之间。所得到的所述前体mRNA的转录本(其中所述外显子被跳读)是在框内的(in frame)。