[发明专利]用于检测核苷酸变异的核酸酶保护方法

权利要求书

1.一种检测样品中靶核酸分子中的核苷酸变异的存在的非诊断方法，包括：

使所述样品与至少两种与包含核苷酸变异的靶核酸分子的相同链互补的探针在足以使第一探针和第二探针与所述靶核酸分子杂交的条件下接触，产生杂交的核酸分子和未杂交的核酸分子的混合物，

其中所述第一探针在所述靶核酸分子核苷酸变异处与野生型互补，其中所述靶核酸分子核苷酸变异位置距所述第一探针的3’末端两个至六个碱基，

其中所述第二探针在所述靶核酸分子核苷酸变异处与第一变异互补，其中所述靶核酸核苷酸变异位置距所述第二探针的5’末端两个至六个碱基，并且其中所述第一和第二探针仅在所述第一探针的3’末端和所述第二探针的5’末端所述变异位置的区域处重叠；或者

其中所述第一探针在所述靶核酸分子核苷酸变异处与野生型互补，其中所述靶核酸分子核苷酸变异位置距所述第一探针的5’末端两个至六个碱基，其中所述第二探针在所述靶核酸分子核苷酸变异处与第一变异互补，其中所述靶核酸核苷酸变异位置距所述第二探针的3’末端两个至六个碱基，并且其中所述第一和第二探针仅在所述第一探针的5’末端和所述第二探针的3’末端所述变异位置的区域处重叠；

在足以移除未杂交的核酸分子的条件下，使杂交的核酸分子和未杂交的核酸分子的混合物与特异性针对单链核酸分子的核酸酶接触；并且

检测所述混合物中至少两种探针中的一种或多种探针的存在，从而检测所述样品中核苷酸变异的存在。

2.权利要求1的方法，其中所述核苷酸变异位置距离所述第一探针的5’末端和所述第二探针的3’末端3个碱基；或者

所述核苷酸变异位置距离所述第一探针的3’末端和所述第二探针的5’末端3个碱基。

3.权利要求1或2的方法，其中所述第一探针和所述第二探针各包含一个可检测标记。

4.权利要求3的方法，其中所述第一探针和所述第二探针是末端标记的。

5.权利要求4的方法，其中：

所述靶核酸分子核苷酸变异位置距离所述第一探针的5’末端2-6个碱基，并且所述可检测标记位于所述第一探针的5’末端，以及

所述靶核酸分子核苷酸变异位置距离所述第二探针的3’末端2-6个碱基，并且所述可检测标记位于所述第二探针的3’末端。

6.权利要求4的方法，其中：

所述靶核酸分子核苷酸变异位置距离所述第一探针的3’末端2-6个碱基，并且所述可检测标记位于所述第一探针的3’末端，以及

所述靶核酸分子核苷酸变异位置距离所述第二探针的5’末端2-6个碱基，并且所述可检测标记位于所述第二探针的5’末端。

7.权利要求3的方法，其中所述可检测标记包括半抗原、荧光分子、酶或放射性同位素。

8.权利要求7的方法，其中所述可检测标记包括生物素。

9.权利要求8的方法，其中检测混合物中一种或多种所述探针的存在包括使所述探针与亲和素或链霉亲和素接触，所述亲和素或链霉亲和素缀合到辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。

10.权利要求3的方法，其中所述第一探针和所述第二探针包含不同的可检测标记。

11.权利要求3的方法，其中所述第一探针和所述第二探针包含相同的可检测标记。