[发明专利]用于检测核苷酸变异的核酸酶保护方法

说明书

本文公开的是利用核酸酶保护测定来检测靶核酸中核苷酸变异的存在的方法。所述方法包括在足以使探针与靶核酸杂交的条件下，使样品与至少两种探针接触，其中第一探针与靶核酸中核苷酸变异位置处的野生型(非变异)核苷酸互补，第二探针与靶核酸中核苷酸变异位置处的变异核苷酸互补，产生杂交的和未杂交的核酸的混合物。在足以移除未杂交的核酸分子(或核酸分子的未杂交部分)的条件下，使所述混合物与特异性针对单链核酸分子的核酸酶接触。然后检测所述至少两种探针的存在，从而检测所述样品中变异和/或非变异靶核酸的存在。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2012年6月29日提交的美国临时申请61/666,456和于2013年5月30日提交的美国临时申请61/829,102的优先权，所述临时申请的全文以引用的方式纳入本说明书。

技术领域

本公开内容涉及检测靶核酸分子中的一种或多种核苷酸变异的方法，特别是利用核酸酶保护方法。

背景技术

许多疾病或紊乱的特征在于破坏蛋白质表达或活性、或破坏细胞信号通路而导致对细胞过程的异常控制或导致细胞的不受控生长和增殖。这些破坏通常是由遗传改变(也称为突变)或影响特定蛋白活性或表达的其他改变引起。许多疾病的诊断和/或治疗方法的选择包括鉴别来自已知或疑似患特定疾病的受试者的样本中特定的遗传改变。

需要持续开发诊断测试和方法，用于检测人类疾病的发生和发展中涉及的突变和分子特征。此类方法和诊断测试尤其将有助筛选于新药物，以及开发选择用于治疗的患者并监测患者对靶向治疗的反应的方法。

发明内容

本说明书公开的是利用核酸酶保护测定来检测靶核酸中核苷酸变异的存在的方法。在一个实施例中，所述方法包括使样品与至少两种探针接触，其中所述第一探针包括与靶核酸中的核苷酸变异位置处的野生型(非变异)核苷酸互补的核苷酸，所述第二探针包括与靶核酸中的核苷酸变异位置处的变异核苷酸互补的核苷酸。使所述样品与所述至少两种探针在足以使所述探针与所述靶核酸杂交的条件下接触，产生杂交的和未杂交的核酸分子的混合物。使所述混合物与特异性针对单链核酸分子的核酸酶接触，接触条件为足以移除未杂交核酸分子(或核酸分子的未杂交部分)的条件。然后检测核酸酶处理后剩余的至少两个探针的存在和/或数量，从而检测所述样品中变异和/或非变异靶核酸的存在。

根据以下具体说明，本公开内容的前述和其他特征将更加显而易见，所述具体说明是参照附图进行的。

附图说明