[发明专利]具有细胞内穿透能力的诱导RNA干扰的核酸分子及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种新型结构的具有细胞内穿透能力的RNAi诱导核酸分子及其用途，更具体地说，涉及一种具有优异的靶基因抑制效率且无需另外的细胞载体而具有细胞内穿透能力的新型结构的核酸分子以及利用该核酸分子的靶基因的表达抑制方法，所述核酸分子具有诱导RNAi的双链核酸分子中含有的至少一个核苷酸的磷酸骨架被硫代磷酸酯(Phosphorothioate)或者二硫代磷酸酯(phosphorodithioate)取代且结合有亲油性化合物(lipophilic compound)的结构。

背景技术

RNA干扰(RNA interference：RNAi)是非常特异的能够有效抑制基因表达的机制，该机制在细胞等中导入双链RNA(dsRNA)而诱导靶基因mRNA的分解，由此抑制靶基因的表达，其中，所述双链RNA(dsRNA)由具有与靶基因的mRNA同源序列的正义链和具有与靶基因的mRNA互补序列的反义链构成。

诱导这样的RNA干扰的siRNA是碱基序列能够特异性地抑制靶标基因表达的短长度(19～21bp)的双链RNA，因为其具有高效率性和靶标特异性，因此目前作为难以治疗的癌、病毒的感染以及遗传病等各种疾病的治疗剂备受关注。在利用siRNA的有效的治疗剂开发方面，还存在稳定性、沉默效率(silencing efficiency)、免疫反应、脱靶效应(off-target effects)等各种需解决的问题，其中体内(in vivo)的有效传递(delivery)成为最难以解决的问题而被指出。siRNA因为磷酸骨架(phosphate backbone)结构而带有高的负电荷(negative charge)，由此无法通过细胞膜，且因为其小的尺寸而在血液(blood)中快速地被去除，由此难以传递充分量的siRNA以在实际靶标部位上实施RNAi诱导。

目前，针对体外释药(in vitro delivery)开发出很多利用阳离子脂质体(cationic lipids)和阳离子聚合物(cationic polymers)的高效传递(delivery)方法(Sioud M，Sorensen DR Cationic liposome-mediated delivery of siRNAs in adult mice.Biochem Biophys Res Commun 2003；312：1220-1225)。但是，大部分情况下，在体内(in vivo)无法如体外(in vitro)那样高效率地传递siRNA，由于与生物体内存在的各种蛋白质发生相互作用(interaction)，因此存在siRNA的传递效率变弱的问题(Bolcato-Bellemin AL，Bonnet ME，Creusat G，et al.Sticky overhangs enhance siRNA-mediated gene silencing.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 2007；104：16050-16055)。另外，根据传递载体(delivery vehicle)的组成，与发生疾病的部位无关地会在肝或肺等特定脏器中高浓度地蓄积，因此还存在诱发毒性的问题。