[发明专利]新型肽标签以及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于目的蛋白质的检测或纯化的表位(epitope)标记系统，更详 细的说，涉及一种源自作为耐辐射球菌(Deinococcusradiodurans)的感光蛋白质 (photoreceptorprotein)的细菌光敏色素(Bacteriophytochrome，BphP)的新型肽标签， 以及能够特异地识别上述肽标签的抗体及能够产生上述抗体的杂交瘤细胞株。并且，本发 明还涉及编码上述肽标签的多核苷酸；涉及包括上述多核苷酸的载体或转化体；以及包括 上述肽标签的融合蛋白质及用于制备、检测或纯化上述融合蛋白质的方法和试剂盒。

背景技术

有用的蛋白质或多肽可通过合成产生或者可以从天然供给源中分离。但是，这种 方法存在在费用、时间方面并不经济，且生产量有限的缺点。因此，优选通过对重组制备的 转化体进行培养而生产目的蛋白质和目的多肽，其中上述重组是为使目的蛋白质或目的多 肽过表达而进行的。但是，在细胞环境中产生的多肽(特别是短的多肽)由于存在于细胞的 蛋白酶的作用而易降解(degradation)，而且，并不是所有目的蛋白质都有抗体，因此不易 纯化没有对应抗体的目的蛋白质。

为了克服这些问题使用了蛋白质标记或表位标记。蛋白质标记(protein tagging)或者表位标记(epitopetagging)是制备将表位标记的编码序列连接于目的蛋白 质的编码序列的重组核酸分子后，使其在合适的宿主细胞中表达，再利用对应于表位标记 的抗体对目的蛋白质进行检测、定量、纯化或在目的蛋白质的细胞内追踪位置，功能鉴定等 的一种重组DNA方法。商业上有很多表位标签和作为其相应配体的抗体，当选择合适抗体的 表位标签和其对应的抗体时，能够使用蛋白质印迹分析(Westernblotanalysis)，免疫沉 淀(immunoprecipitation)，免疫荧光(immunofluorescence)，免疫细胞化学 (immunocytochemistry)，免疫亲和纯化(immunoaffinitypurification)等方法对目的蛋 白质进行检测或纯化，因此可以消除对目的蛋白质产生抗体的必要性。

目前使用于蛋白质标记(proteintagging)或者表位标记(epitopetagging)的 表位标签有从六个氨基酸残基程度的短肽标签(例如，6×组氨酸(Histidine，His)标签)至 40kDa程度大的蛋白质(例如，MBP)的很多独特的标记[参见Stevens,R.C.,(2000) StructureFoldDes8:R177-85]，而一般会使用由3至30个氨基酸构成的肽标签。His-标 记的蛋白质在Ni-NTA(镍-次氮基三乙酸)的树脂上被特异性地捕获，且其可以通过EDTA或 咪唑被洗脱下来。除此之外，麦芽糖结合蛋白质(MBP)(396个氨基酸，40kDa)、金黄色葡萄球 菌蛋白质A、钙调蛋白质结合肽(CBP)(26个氨基酸，2.96kDa)、绿色荧光蛋白质(Green FluorescentProtein，GFP)(238个氨基酸，27kDa)及谷胱甘肽-S-转移酶(GST)(211个氨基 酸，26kDa)也可用于原核生物及真核生物蛋白质的检测或纯化。并且，通常最常用的表位标 签有c-myc标签，HA标签，FLAG标签等。c-myc标签是源于人的c-myc蛋白质的长度为10个氨 基酸的表位标签[Evansetal.,(1985)Mol.Cell.Biol.,12:3610-3616]，HA标签是源自流 感病毒血凝素(influenzahemagglutinin)HA-1蛋白质的长度为9个氨基酸的表位标签 [Fieldetal.,(1988)Mol.Cell.Biol.,8:2159-2165]，FLAG标签是源自噬菌体T7的长度 为8个氨基酸的表位标签[Hoppetal.,(1988)Bio/Technology,6:1204-1210]。