[发明专利]经修饰的腺伴随病毒载体组合物

说明书

公开了包含长度为3300‑4200个核苷酸的核酸的腺伴随病毒填充物组分。

相关申请

本专利申请要求享有于2012年7月6日提交的美国申请系列号61/668,839的优先权权益，所述申请通过引用并入本文。

序列表

本申请包含序列表，所述序列表已通过EFS-Web以ASCII格式递交，并且以其整体通过引用并入本文。所述ASCII副本，于2013年3月14日生成，命名为17023.126WO1_SL.txt，并且大小为39,125字节。

背景

腺伴随病毒（AAV）是细小病毒科（parvoviridae family）的小的非致病病毒。AAV通过其依靠辅助病毒进行复制而与该科其他成员区别。AAV的约5kb基因组由一段正或负极性的单链DNA组成。基因组的末端是短的反向末端重复，其可以折叠为发夹结构并且作为病毒DNA复制起点。在物质上(Physically)，细小病毒病毒体是无包膜的并且其二十面的衣壳直径约20nm。

迄今为止，已经鉴定很多种血清学上不同的AAV，并且已经从人或灵长类中分离。Govindasamy 等, “Structurally Mapping the Diverse Phenotype of Adeno-Associated Virus Serotype 4,” J. Vir., 80 (23):11556-11570 (2006)。例如，AAV2的基因组长度为4680个核苷酸并且包含两个可读框（ORF）。左侧的ORF编码非结构性的Rep蛋白，Rep 40、Rep 52、Rep 68和Rep 78，它们除了涉及单链的后代基因组的产生，还涉及复制和转录的调节。Rep68/78同样显示出具有NTP结合活性和DNA和RNA解旋酶活性。Rep蛋白具有核定位信号和几个潜在的磷酸化位点。这些激酶位点之一的突变，导致复制活性的丢失。

基因组的末端是短的反向末端重复（ITR），所述反向末端重复具有潜力以折叠为作为病毒DNA复制起点的T形发夹结构。在ITR区中已描述对于ITR功能重要的两个元件，GAGC重复基序和末端解离位点（trs）。重复基序已显示出当ITR为线性或发夹构象时均结合Rep。该结合作用于位置Rep68/78用于在trs切割，其以位点和链特异性的方式发生。

AAV的以下特征使得其成为用于基因转移的有吸引力的载体。AAV载体具有广泛的宿主范围；在体外和体内转导分裂的和不分裂的细胞，并且维持转导基因高水平的表达。病毒颗粒是热稳定的、耐溶剂的、耐去污剂的、耐pH变化的、耐温度变化的，并且可以在CsCl梯度中浓缩。AAV不与任何致病事件有关，并且使用AAV载体转导没有发现对细胞生长或分化诱导任何持续的负面影响。ITR已显示为是允许完全去除病毒基因以产生载体系统的包装所需的唯一顺式(cis)元件。

目前需要具有改进的包装特征的AAV载体。

概述

在某些实施方案中，本发明提供腺伴随病毒（AAV）填充物(filler)组分（也称为“填充片段(stuffer)序列”），其包含与SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO:2具有至少90%同一性的长度为3300-4200个核苷酸的核酸。

在某些实施方案中，本发明提供腺伴随病毒（AAV）填充物组分，其由与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少90%同一性的长度为3300-4200个核苷酸的核酸组成。

在某些实施方案中，本发明提供AAV载体，其包含上述填充物组分。

附图和表格简述