[发明专利]无染色剂蛋白定量和标准化有效
申请号: | 201380034366.4 | 申请日: | 2013-04-25 |
公开(公告)号: | CN104412097B | 公开(公告)日: | 2017-07-07 |
发明(设计)人: | S·福瑞比;刘宁;K·麦克唐纳德;A·保勒斯;A·珀什 | 申请(专利权)人: | 生物辐射实验室股份有限公司 |
主分类号: | G01N21/64 | 分类号: | G01N21/64;G01N21/76;G01N21/33;G01N33/52;G01N33/68;G06F19/20;G01J1/18;G01J3/443;C12Q1/06 |
代理公司: | 上海专利商标事务所有限公司31100 | 代理人: | 余颖 |
地址: | 美国加利*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 染色剂 蛋白 定量 标准化 | ||
1.一种使用测得的卤烷基化色氨酸荧光对目标蛋白样品中蛋白总量进行定量的方法,所述方法包括:
对目标蛋白样品和多个参考蛋白样品,
将所述的蛋白样品暴露于UV光,同时使所述的蛋白样品与卤代有机化合物接触,从而使所述蛋白样品中的色氨酸残基与卤代有机化合物发生共价反应,并
检测所述蛋白样品中蛋白质发射的荧光,其中所述的荧光是卤烷基化色氨酸荧光;
对各个参考蛋白样品,提供所述参考蛋白样品中的蛋白总量并对从所述参考蛋白样品中检测到的卤烷基化色氨酸荧光量进行定量;
对从所述目标蛋白样品中检测到的卤烷基化色氨酸荧光量进行定量;以及
基于所述参考蛋白样品中的蛋白总量和从所述参考蛋白样品和所述目标蛋白样品中检测到的卤烷基化色氨酸荧光的量,对所述目标蛋白样品中的蛋白总量进行定量,其中所述目标蛋白样品包含50或更多种不同的蛋白,所述参考蛋白样品包含50或更多种不同的蛋白。
2.如权利要求1所述的方法,在计算机上对所述目标蛋白样品中的蛋白总量进行定量。
3.如权利要求1所述的方法,所述目标蛋白样品含有1000或更多种不同蛋白。
4.如权利要求1所述的方法,所述目标蛋白样品获自血清样品、组织匀浆或细胞裂解物。
5.如权利要求1所述的方法,所述参考蛋白样品各含有1000或更多种不同蛋白。
6.如权利要求1所述的方法,至少一种参考蛋白样品获自血清样品、组织匀浆或细胞裂解物。
7.如权利要求1所述的方法,至少两种参考蛋白样品获自同一生物个体的不同细胞或组织。
8.如权利要求1所述的方法,至少两种参考蛋白样品获自同一物种的不同生物个体。
9.如权利要求1所述的方法,至少两种参考蛋白样品获自不同物种。
10.如权利要求1所述的方法,至少一种所述参考蛋白样品中的蛋白总量由分光光度测量测得。
11.如权利要求1所述的方法,还包括构建使所述参考蛋白样品的蛋白总量与卤烷基化色氨酸荧光量相关联的标准曲线的步骤,并使用所述标准曲线对所述目标蛋白样品中的蛋白总量进行定量。
12.如权利要求11所述的方法,通过线性内插法或线性外推法对所述目标蛋白样品中的蛋白总量进行定量。
13.一种使用测得的卤烷基化色氨酸荧光定量比较两种目标蛋白样品中相对蛋白总量的方法,其中每种目标蛋白样品包含50或更多种不同的蛋白,所述方法包括:
将所述的蛋白样品暴露于UV光,同时使所述的蛋白样品与卤代有机化合物接触,从而使所述蛋白样品中的色氨酸残基与卤代有机化合物发生共价反应;
检测所述蛋白样品中蛋白质发射的荧光,其中所述的荧光是卤烷基化色氨酸荧光;
对从各目标蛋白样品中检测到的卤烷基化色氨酸荧光量进行定量;
计算从所述两种目标蛋白样品中检测到的卤烷基化色氨酸荧光量的比例;以及
基于所述比例比较所述目标蛋白样品中的相对蛋白总量。
14.如权利要求13所述的方法,在计算机上比较所述目标蛋白样品中的相对蛋白总量。
15.如权利要求13所述的方法,从所述目标蛋白样品中检测到的卤烷基化色氨酸荧光量的所述比例被解释为所述目标蛋白样品中总蛋白量之间的比例。
16.如权利要求13所述的方法,各目标蛋白样品含有1000或更多种不同蛋白。
17.如权利要求13所述的方法,各目标蛋白样品获自血清样品、组织匀浆或细胞裂解物。
18.如权利要求1或13所述的方法,通过获取电泳凝胶或印迹膜的部分的图像,并测量所述图像中所述蛋白样品所引起的卤烷基化色氨酸荧光总量,从而对从各蛋白样品中检测到的卤烷基化色氨酸荧光量进行定量,所述电泳凝胶或印迹膜的部分包含所述蛋白样品。
19.如权利要求18所述的方法,所述电泳凝胶或印迹膜包括多条泳道,且所述电泳凝胶或印迹膜的部分对应一条泳道。
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