[发明专利]制备低内毒素壳聚糖的方法

说明书

本发明涉及制备低内毒素碱性壳聚糖的方法，还涉及制备低内毒素中性壳聚糖、壳聚糖盐和壳聚糖衍生物的方法，并涉及这些方法的产物。所述方法包括使壳聚糖与碱性溶液接触，以形成混合物，并让混合物保持至少约12小时。可用低内毒素碱性壳聚糖制备其它有用的基于壳聚糖的产物。

本发明涉及制备低内毒素碱性壳聚糖的方法，还涉及制备低内毒素中性壳聚糖、壳聚糖盐和壳聚糖衍生物的方法，并涉及这些方法的产物。

壳聚糖特别用于制备控制出血使用的止血材料。

壳聚糖是来自甲壳类动物处理的固体废物衍生物，并且可从真菌培养物提取。壳聚糖是水不溶性阳离子聚合物质。在壳聚糖用于止血材料之前，通常首先转化成水溶性盐。以这种方式，壳聚糖盐在血液中可溶形成阻止血流的凝胶。

由于壳聚糖在身体中容易分解，壳聚糖盐理想适用于本文所述应用。壳聚糖通过溶菌酶转化成葡糖胺，并因此自然从身体排泄。不必从身体去除壳聚糖。另外，壳聚糖盐显示温和的抗菌性质，因此，它们的使用减小感染风险。

为了在适用于控制出血的止血材料制备中利用壳聚糖，有必要保证壳聚糖具有足够低的内毒素浓度。

内毒素是格兰氏阴性菌的外膜表面上存在的脂多糖。内毒素对哺乳动物为高度毒性，特别是对人，且众所周知难以从材料去除。在释放进入血流或通常未发现它们的其它组织时，内毒素可变成热原性。因此，内毒素必须从药学上可接受的产物去除。

处理去除或破坏热原，特别是内毒素，被称为“去热原”法。包含内毒素的材料去热原的技术包括离子交换色谱、超滤、蒸馏和针对破坏内毒素的各种化学方法。

WO2008063503涉及从壳聚糖去除内毒素的方法，所述方法包括以下步骤：

a) 在无菌环境中使用无菌无热原设备和材料；

b) 使包含内毒素的壳聚糖溶胀最多24小时；

c) 使1kg/25L至1.5kg/25L壳聚糖溶于0.01M至4.0M氢氧化物碱；

d) 连续搅拌所得壳聚糖碱溶液；

e) 在搅拌下，将溶液在60-100℃之间加热45分钟至4小时；

f) 用最多10x体积超纯无内毒素水冲洗溶液；

g) 将溶液中和到6.8和7.5之间的pH；

h) 形成超纯低内毒素壳聚糖浆料，并转移到无内毒素封闭系统；

i) 从浆料去除过量水。

这是一个复杂且费用大的过程，尤其需要无菌设备，且需要用10x体积无内毒素的水冲洗溶液。

US2006293509涉及通过以下步骤制备具有低内毒素的水溶性壳聚糖的方法：

(a)使水不溶性壳聚糖与碱性溶液接触大于1小时的第一时间段；

(b)理想用无内毒素水冲洗水不溶性壳聚糖，以去除残余碱性溶液；

(c)使水不溶性壳聚糖在包含相转移剂的反应溶液中部分乙酰化；

(d)使部分乙酰化的水溶性壳聚糖溶于包含表面活性剂且具有约7.0至约7.4的pH的水溶液；

(e)将水混溶性溶剂加入到水溶液，并进一步将水溶液的pH调节到至少8.0的pH，以使具有低内毒素含量的水溶性壳聚糖从水溶液/水混溶性溶剂混合物沉淀；和

(f) 任选在非溶剂中洗涤，例如，异丙醇。

然而，这一过程复杂且花费大，并且合乎需要包括使用大量无内毒素的水或其它液体。此过程也需要使用相转移剂，并且经数小时进行。