[发明专利]稳定化的蛋白溶液

说明书

本发明涉及在超滤期间通过添加蔗糖到高度浓缩的蛋白溶液中来稳定化高度浓缩的蛋白溶液的方法，特别地但不排他地涉及在超滤期间通过添加蔗糖到高度浓缩的抗体溶液中来稳定化高度浓缩的抗体溶液的方法。

描述

本发明涉及浓缩的含蛋白的溶液的超滤，特别是浓缩的含抗体的溶液的超滤，特别是在超滤期间这些溶液的稳定化。

背景技术

许多含有可注射蛋白的溶液，特别是含有抗体的溶液被供应到市场上。由于注射体积的限制，这些溶液用于皮下注射的用途导致了对溶液的高浓度的需求。

抗体纯化的一般方法是现有技术中熟知的，并例如在Pete Gagnon:Purification Tools for monoclonal Antibodies (1996) ISBN-9653515-9-9中描述。

溶液中的抗体纯化后，通过使用超滤(UF)增加抗体浓度以及，然后，在某一点上（通常在大约50 g/L抗体(mAb)浓度），通过超滤将制剂缓冲液渗滤到溶液中，然后通常将配制的溶液进一步浓缩到100 g/L和300 g/L之间的其终浓度，不含蔗糖，通常在最终的超滤浓缩后将蔗糖添加到产物中。在通过超滤浓缩蛋白/抗体期间，在膜表面的蛋白浓度（所谓的壁面浓度）可增加到高水平。这可以证明对蛋白/抗体有害并引起它变性和沉淀。这往往被认为是在计算的蛋白浓度和测量的蛋白浓度中观察到差异的原因。

对于通过滞留物中UV280 nm吸收实际测量的浓度通过在缩减系数(reductionfactors)基础上进行计算的不同浓度的问题影响超滤过程的产率。这个问题的已知解决方案是尝试通过用缓冲液冲洗组件(module)数次以回收蛋白，但回收的蛋白将表现出大大降低的浓度。

因此需要方法来解决超滤期间高度浓缩的蛋白溶液的变性和沉淀的问题。

已经表明，蛋白溶液中的高浓度蔗糖可以稳定溶液中的蛋白，特别是在这些溶液的延长储存期间防止聚集。然而，感染风险可导致避免用蔗糖作为超滤期间或者其它纯化或浓缩步骤的组分。

发明概述

本发明提供了高度浓缩的蛋白溶液的超滤方法。本发明还提供了在超滤期间稳定化高度浓缩的蛋白溶液的方法。

本发明提供了高度浓缩的蛋白溶液的超滤方法，由此在超滤期间通过添加蔗糖到溶液中来稳定化蛋白溶液。本发明还提供了高度浓缩的蛋白溶液的超滤方法，其中蛋白是抗体。

发明描述

本发明提供了高度浓缩的蛋白溶液的超滤方法。本发明还提供了在超滤期间稳定化高度浓缩的蛋白溶液的方法。

已经令人惊奇地发现，在通过超滤进一步浓缩前将蔗糖添加到高度浓缩的蛋白溶液中似乎保护蛋白免于超滤期间的变性和沉淀。这导致了蛋白更高的产率或回收率%以及更低的浊度和聚集物形成，如超滤期间通过%HMWP所测量的。

如本文所使用的术语“蛋白”、“多肽”和“肽”意思是由肽键连接的至少五个组成氨基酸构成的化合物。组成氨基酸可来自由遗传密码编码的氨基酸的组并且它们可以是并非由遗传密码编码的天然氨基酸以及合成氨基酸。非遗传密码编码的天然氨基酸是例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸、鸟氨酸、磷酸丝氨酸、D-丙氨酸和D-谷氨酰胺。合成氨基酸包含由化学合成制备的氨基酸，即由遗传密码编码的氨基酸的D-异构体，例如D-丙氨酸和D-亮氨酸，Aib（α-氨基异丁酸）、Abu（α-氨基丁酸）、Tle（叔丁基甘氨酸）、β-丙氨酸、3-氨甲基苯甲酸和邻氨基苯甲酸。

如本文所使用的术语“抗体”和/或“mAb”涵盖单克隆抗体（包括具有免疫球蛋白Fc区的全长抗体）、带有多表位特异性的抗体组合物、双特异性抗体、双体(diabodies)和单链分子，以及抗体片段（例如Fab、F(ab’)₂和Fv）。