[发明专利]尿激酶型纤溶酶原激活剂转基因小鼠

说明书

技术领域

本发明涉及将含有肝特异性启动子/增强子和在它们的控制下可驱动地被连接的编码尿激酶型纤溶酶原激活剂的cDNA的DNA片段导入ES细胞并使用该ES细胞制作的以杂合体型导入该DNA片段的肝损伤小鼠。

背景技术

通常，在人疾病的研究中期望使用人的细胞进行实验。特别是，在确认物种特异性的多个药物代谢酶、宿主局限于人的病毒等所参与的疾病的研究中，需要使用人细胞，特别是人肝细胞。但是，人肝细胞的供给受到限制，维持人肝细胞的分化状态的状态下在体外(in vitro)进行增殖是非常困难的。对于人肝细胞的增殖，利用生物体内的环境是比较高效的。即，尝试通过将人肝细胞移植到对以免疫缺陷化的小鼠作为遗传背景的小鼠导入促进小鼠肝细胞死亡的基因而成的转基因小鼠，使人肝细胞增殖，从而大量地将小鼠肝细胞置换为人肝细胞。

病毒对人的肝脏感染所引起的肝疾病是近年来医疗领域所面对的难以治疗的疾病之一。对这些感染人肝细胞的病毒具有感受性的动物种类局限于人、猩猩。为了开发针对这些病毒感染的治疗药，需要使用人的肝细胞的试验。另外，也认为肝细胞对药物代谢发挥重要的作用，各个药物在人体中的代谢途径的阐明与新的医药品的开发相关。但是，很多的药物代谢酶存在物种特异性，为了阐明人体中的药物代谢途径，需要使用人肝细胞进行试验。

对于丙型肝炎病毒(HCV)，据推测在日本丙型肝炎病毒的持续感染者(HCV携带者)有约150万人，除此以外约40-50万人正在接受治疗，据说接受干扰素给药的丙型慢性肝炎的患者一年有3-4万人。最近，将病毒基因组的各种部位作为靶标的新的抗病毒药正在开发中，但是，由于没有可信性、再现性高的HCV用动物模型，因此其进展受到很大阻碍。这并不局限于HCV，也可以说乙型肝炎病毒(HBV)等其它病毒性肝炎也是同样的。由于这些病毒仅以人和猩猩作为宿主，因此在使用动物的大规模抗病毒药的开发研究中，人肝细胞与宿主肝细胞置换的小型模型动物的开发受到期待。

脂肪肝是以中性脂肪向肝脏的蓄积为原因而发病，但是，近年来通过脂肪在肝脏中蓄积而引起的肝炎，即非酒精性脂肪性肝炎(NASH：Non-alcoholic steatohepatitis)增加，这一疾病是有可能发展为慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌等预后不良疾病的疾病。另一方面，指出不存在对这样的肝疾病有效的治疗药(非专利文献1)。在这一治疗药开发中也需要最合适的动物模型的存在。

对于以上的疾病研究，如果能够利用置换为人肝细胞的模型动物，则有助于很多药物开发研究。但是，对于该模型动物的制作而言，将人肝细胞移植到作为宿主的动物之后，需要人肝细胞高效地增殖，与宿主的肝细胞进行置换。

目前为止，通过使尿激酶型纤溶酶原激活剂(以下简称“uPA”)基因肝脏特异性表达，制作了若干对小鼠肝细胞造成损伤的转基因小鼠，报告了若干对该小鼠移植人肝细胞的例子。报告了使用uPA基因组序列制作的uPA转基因小鼠(非专利文献2)、使用uPA的cDNA制作的uPA转基因小鼠(非专利文献3)。这些uPA转基因小鼠均以杂合体型具有uPA基因的情况下，被移植的人肝细胞生存是困难的，因此需要以纯合体型具有uPA基因。但是，为了制作以纯合体型具有uPA基因的转基因小鼠，需要至少2代，最短也需要6个月，而且相对得到的小鼠的总数，仅能以约25％的比例得到纯合体型小鼠，在短时间内制作大量的以纯合体型具有uPA基因的转基因小鼠是困难的。另外，基于同样的理由，制作与其它的转基因小鼠的杂交系是困难的。而且，以往使用uPA基因组序列的转基因小鼠随着时间的经过，肝脏中导入的uPA基因发生重组，观察到uPA基因的脱落，uPA基因脱落的小鼠细胞再生为二次肝细胞，因此即使将人肝细胞移植入杂合体型小鼠，生存也是困难的。此外，即使是纯合体型，也频繁发现由于uPA基因的脱落所致的小鼠肝细胞的再生而引起生存的人肝细胞渐渐减少的小鼠。在本领域期望能够高效地大量生产的以及能够容易制作与其它转基因小鼠的杂交系的uPA转基因小鼠。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1:N Engl J Med.346：1221-31(2002)

非专利文献2:Cell66：245-256(1991)

非专利文献3:BBRC377：248-252(2008)

发明内容

本发明提供虽然以杂合体型具有uPA基因，但是对来源于小鼠的肝细胞的损伤度高的肝损伤小鼠及其高效的制作方法。