[发明专利]尿激酶型纤溶酶原激活剂转基因小鼠

权利要求书

1.一种以杂合体型具有uPA基因的肝损伤小鼠的制作方法，其特征在于，具有以下工序：

(i)利用DNA片段转化小鼠ES细胞的工序，所述DNA片段含有肝特异性启动子/增强子以及在它们的控制下可驱动地被连接的编码尿激酶型纤溶酶原激活剂的cDNA；

(ii)将工序(i)得到的转化了的小鼠ES细胞注入宿主胚胎的工序；

(iii)将工序(ii)得到的注入了ES细胞的宿主胚胎移植到代孕母小鼠的子宫获得嵌合体小鼠的工序；以及

(iv)将工序(iii)得到的嵌合体小鼠交配，得到以杂合体型导入了该DNA片段的转基因小鼠的工序。

2.根据权利要求1所述的方法，进一步具有(v)获得2～3周龄的血清ALT值是30Karmen单位以上的转基因小鼠的工序。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，肝特异性启动子是白蛋白启动子。

4.一种肝损伤小鼠及其一部分，其特征在于，是利用权利要求1～3的方法制作的。

5.一种免疫缺陷肝损伤小鼠，其特征在于，是通过将权利要求4所述的肝损伤小鼠与SCID小鼠交配而得到的。

6.一种嵌合体小鼠的制作方法，其特征在于，包括对权利要求5所述的免疫缺陷肝损伤小鼠移植人肝细胞，该嵌合体小鼠具有含有人肝细胞的嵌合体肝。

7.一种嵌合体小鼠，其特征在于，具有由权利要求6所述的方法制作的含有人肝细胞的嵌合体肝。

8.一种嵌合体小鼠，其特征在于，其免疫缺陷，以杂合体型具有DNA片段，且具有含有人肝细胞的嵌合体肝，所述DNA片段含有肝特异性启动子/增强子以及在它们的控制下可驱动地被连接的编码尿激酶型纤溶酶原激活剂的cDNA。

9.根据权利要求7或8所述的嵌合体小鼠，其中，人肝细胞占嵌合体肝的肝细胞的至少10％。

10.根据权利要求7或8所述的嵌合体小鼠，其中，人肝细胞在嵌合体肝中保持其功能和特性至少2周以上。

11.一种对人肝功能产生影响的物质的筛选方法，其特征在于，包括以下的(a)～(c)工序：

(a)将被检物质给予到权利要求7～10中任一项所述的嵌合体小鼠的工序；

(b)对在(a)中给予了该被检物质的该嵌合体小鼠的选自人白蛋白浓度、体重曲线、肝重量体重比、总白蛋白值、总蛋白值、ALT值、AST值和总胆红素值中的一个以上进行测定的工序；以及

(c)与未给予该被检物质的该嵌合体小鼠的人白蛋白浓度、体重曲线、肝重量体重比、总白蛋白值、总蛋白值、ALT值、AST值、和总胆红素值进行比较，选择(b)中测定的人白蛋白浓度、体重曲线、肝重量体重比、总白蛋白值、总蛋白值、ALT值、AST值和总胆红素值中的任意一个以上产生增减的被检物质的工序。

12.一种评价被检物质对人肝细胞的毒性的方法，其特征在于，包括以下的(a)～(c)工序：

(a)将被检物质给予到权利要求7～10中任一项所述的嵌合体小鼠的工序；

(b)对在(a)中给予了该被检物质的该嵌合体小鼠的选自人白蛋白浓度、体重曲线、肝重量体重比、总白蛋白值、总蛋白值、ALT值、AST值和总胆红素值中的一个以上进行测定的工序；以及

(c)与未给予该被检物质的该嵌合体小鼠的人白蛋白浓度、体重曲线、肝重量体重比、总白蛋白值、总蛋白值、ALT值、AST值和总胆红素值进行比较，将(b)中测定的人白蛋白浓度、体重曲线、肝重量体重比、总白蛋白值、总蛋白值、ALT值、AST值和总胆红素值中的任意一个以上的增减作为指标，评价该被检物质对人肝细胞的影响的工序。