[发明专利]半合成抗生素生产中的类MbtH蛋白

权利要求书

1.制备N-α-氨基-4-羟苯基乙酰基β-内酰胺抗生素或N-α-氨苯基乙酰基β-内酰胺抗生素的方法，其中所述方法包括以下步骤：

(a)将4-羟苯基甘氨酸或苯基甘氨酸、半胱氨酸和缬氨酸与非核糖体肽合成酶接触，以分别产生4-羟苯基甘氨酰基-半胱氨酰基-缬氨酸三肽或苯基甘氨酰基-半胱氨酰基-缬氨酸三肽；

(b)将在步骤(a)中得到的三肽与异青霉素N合成酶接触，

其特征在于类MbtH蛋白的存在。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述类MbtH蛋白具有SEQ ID NO：18、19、20、30、31或32或者至少50％同源于SEQ ID NO：18、19或20、30、31或32的序列。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述类MbtH蛋白具有氨基酸代码NXEXQXSXWP-X₅-PXGW-X₁₃-L-X₇-WTDXRP。

4.根据权利要求1-3中的任意一项所述的方法，其中所述非核糖体肽合成酶包括特异于4-羟苯基甘氨酸和/或苯基甘氨酸的第一模块M1、特异于半胱氨酸的第二模块M2和特异于缬氨酸的第三模块M3。

5.根据权利要求1-4中的任意一项所述的方法，其中在真核微生物中进行所述方法。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述真核微生物是青霉菌属。

7.根据权利要求4-6中的任意一项所述的方法，其中所述β-内酰胺抗生素是N-α-氨苯基乙酰基β-内酰胺抗生素，所述第一模块M1包括一个腺苷酰化功能域，其中所述腺苷酰化功能域选自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7和至少50％同源于SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6或7的序列。

8.一种真核宿主细胞，其中所述宿主细胞包括非核糖体肽合成酶、异青霉素N合成酶和能够表达类MbtH蛋白的多核苷酸。

9.根据权利要求8所述的宿主细胞，其中所述类MbtH蛋白具有SEQ ID NO：18、19、20、30、31或32或者至少50％同源于SEQ ID NO：18、19或20、30、31或32的序列。

10.根据权利要求8所述的宿主细胞，其中所述类MbtH蛋白具有氨基酸代码NXEXQXSXWP-X₅-PXGW-X₁₃-L-X₇-WTDXRP。

11.根据权利要求8-10中的任意一项所述的宿主细胞，其是Penicillium chrysogenum、Acremonium chrysogenum或Aspergillus nidulans。