[发明专利]一种高分子量γ- 聚谷氨酸的生产方法

权利要求书

1.一种高分子量γ-聚谷氨酸的生产方法，其特征在于：以地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）CGMCC NO.3336为出发菌株，通过液体深层发酵制备，包括如下步骤：

（1）菌种活化：将地衣芽孢杆菌CGMCC NO.3336原始菌株接种在斜面培养基上，于37℃培养16小时，如此活化2-3次，制备成熟的斜面种子；

所述斜面培养基组成为：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl10g/L，琼脂20g/L，pH7.2，不足部分纯净水补足；

（2）种子液的制备：将一环活化后的斜面种子接种于装有50ml液体培养基的500ml三角瓶中，37℃，220rpm培养16小时至对数生长期；

所述种子培养基组成为：葡萄糖30g/L，酵母膏7g/L，胰蛋白胨10g/L，K₂HPO₄0.5g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，pH7.2，不足部分纯净水补足；

（3）发酵罐发酵：将步骤（2）中的种子液以10%的接种量接种于发酵罐，30L发酵罐发酵培养基装液量为15L，初始发酵温度38-40℃，罐压0.01-0.05Mpa通风量0.5-1.0vvm，转速400-600rpm；当发酵液OD₆₆₀在0.550-0.600时，控制发酵温度30-35℃，调节转速至200-350rpm，通风量1.5-2.0vvm，并开始补加流加培养基，控制pH在7.2-7.5至发酵结束前2-6小时，发酵时间72h；

所述发酵培养基组成为：葡萄糖40-60g/L，酵母膏15-25g/L，NH₄NO₃3.5-5.5g/L，MgSO₄·6H₂O0.5-1.2g/L，NaCl8.0-12g/L，CaCl₂·6H₂O1-1.5g/L，FeSO₄0.008-0.010g/L,谷氨酸钠70-80g/L,pH值7.2-7.5,不足部分纯净水补足；

所述流加培养基组成为：葡萄糖650-850g/L，氯化钠30.0-60.0g/L，CaCl₂·6H₂O10-15.0g/L，MnSO₄5-10g/L，MgSO₄5-20g/L，pH值7.2-7.5,不足部分纯净水补足。

2.如权利要求1所述的一种高分子量γ-聚谷氨酸的生产方法，其特征在于：所述流加培养基组成为：葡萄糖750g/L，氯化钠50.0g/L，CaCl₂·6H₂O12g/L，MnSO₄8g/L，MgSO₄15g/L，pH值7.4,不足部分纯净水补足。

3.如权利要求1所述的一种高分子量γ-聚谷氨酸的生产方法，其特征在于：所述流加培养基组成为：葡萄糖650g/L，氯化钠30.0g/L，CaCl₂·6H₂O10g/L，MnSO₄5g/L，MgSO₄5g/L，pH值7.2,不足部分纯净水补足。

4.如权利要求1所述的一种高分子量γ-聚谷氨酸的生产方法，其特征在于：所述流加培养基组成为：葡萄糖850g/L，氯化钠60.0g/L，CaCl₂·6H₂O15.0g/L，MnSO₄10g/L，MgSO₄20g/L，pH值7.5,不足部分纯净水补足。