[发明专利]天然孕马结合雌激素纯化精制方法及其所用非离子非极性精细分离树脂的应用

说明书

技术领域

本发明涉及利用精细分离树脂对天然孕马结合雌激素粗提物进行纯化精制的技术领域，是一种天然孕马结合雌激素纯化精制方法及其所用非离子非极性精细分离树脂的应用。

背景技术

结合雌激素类药物主要用于激素替代疗法（Hormone Replacement Therapy, HRT），用于缓解任何雌激素不足的临床症状，治疗和预防女性生理或人工绝经后出现的更年期综合症，能够预防和治疗骨质疏松症，冠心病和老年痴呆症最新的临床研究发现早期HRT可以预防冠心病和老年痴呆。天然的结合雌激素以其好的疗效和耐受性得到了长久的应用。

结合雌激素来源于生物样品，成份复杂多样，目前发现，孕马尿提取物中至少含有200种以上的成份，许多成份的结构至今还不明确，它们的化学性质和生物活性尚未完全探明。

孕马尿中的化学成份复杂，要从孕马尿中提取分离有效成份，即结合雌激素，必须要借助于不断发展的提取分离技术，提取分离技术的发展过程往往也是提取设备以及分离材料多元化、现代化的过程。从20世纪30年代至今，结合雌激素的提取分离等方面的研究一直是国内外的研究热点，已有大量的专利公开和文献报道。

早期报道的结合态雌激素提取方法的专利有美国专利：NO.2429398、NO.2519516、NO. 2696265、NO. 2711988、NO. 2834712，主要是利用有机溶剂萃取法获得结合雌激素。现今，申请号为NO.2004072814的美国专利文献以及公开号为CN1691951A中国专利文献也公开使用了多种液-液萃取系统用于获得结合雌激素。

上世纪60年代开始出现利用活性炭，离子交换树脂以及凝胶色谱填料从孕马尿中获得结合雌激素的方法。另外，1998年9月29日公告的Ivan Ban等人的美国专利5814624公开了一种方法，即在反相(reverse—phase)(RP)硅胶上，通过固相提取，从孕马尿液中获得含结合雌激素天然提取物的方法。

从上世纪九十年代末应用新型的大孔树脂从孕马尿中获取结合雌激素开始逐渐显露出前所未有的优势。大孔吸附树脂是20世纪60年代初开发出的一类新型高分子分离材料，它是一种高聚物吸附剂，根据其孔径、比表面积及构成类型分为许多型号。根据其本身的特点，不同型号的大孔吸附树脂，从孕马尿中获得天然结合雌激素的方法也不同。公开的专利文献有：美国专利NO. 5723454，美国专利NO. 5814624,中国专利文献CN 1308083A、CN 1381240A、CN1526721A。

采用上述已公开的方法获取的天然结合雌激素提取物或提取液中除含有具有生物活性的结合态雌激素外，还含有其它尿内成份，如酚酸类，无机酸盐类。另外，其中还含有相当一部分为亲脂类成份，如：非结合型类黄酮，非结合型异类黄酮，主要包括各种黄酮，异黄酮，异戊二烯衍生物和类似化合物，例如专利文献WO2004/035067报道的7-羟基-4’-甲氧异黄酮，染料木黄酮，大豆黄素，鸡豆黄素等；非结合型类固醇类成份，主要包括非结合态孕激素以及非结合态雄激素，例如：3β，20β-二醇-5α-孕烷、孕酮、3β-羟基-16-酮-5α-雄烷、甲基睾丸素等成份；非结合型雌激素类成份。这些亲脂类化合物主要来源于妊娠孕马体内代谢产物，如激素等，摄入的植物等。这些亲脂化合物常以游离态形式存在，它们不是结合雌激素的活性有效成份，本身具有所不期望的生理作用，是结合雌激素提取物的杂质成份。这些杂质成份的存在还对结合雌激素提取物的品质构成了影响，如：结合雌激素提取物色泽较深，并带有不良的异味。以这种提取物为原料制备的药物制剂外观、气味不好，影响患者用药的依从性。另外，虽然结合雌激素天然混合物的组成不会应为额外存在的非结合型亲脂化合物而有所改变，但是基于干物质的结合雌激素含量却会因此降低。通过针对性地去除非结合型亲脂成份，可以提高所获得的提取物中活性成份（结合雌激素）的浓度。因此，为了去除结合雌激素提取物的杂质，淡化结合雌激素提取物的色泽，去除结合雌激素提取物的异味，提高结合雌激素基于干物质的比例，精制结合雌激素提取物提高结合雌激素的纯度，获得高质量结合雌激素，人们利用进一步的液-液萃取或进一步的树脂固相提取法对结合雌激素提取物进行精制，以下是已经公开报道的结合雌激素的精制方法。