[发明专利]一种能降解利用餐厨废弃物的基因重组酿酒酵母

权利要求书

1.一种能降解利用餐厨废弃物的基因重组酿酒酵母，其特征在于，该基因重组酿酒酵母是将α-淀粉酶基因、糖化酶基因和酸性蛋白酶基因通过酿酒酵母表达载体同时转入酿酒酵母并获得正确的分泌表达而构建成的。

2.根据权利要求1所述的基因重组酿酒酵母，其特征在于，所述的酿酒酵母表达载体为酿酒酵母多基因共表达载体。

3.根据权利要求2所述的基因重组酿酒酵母，其特征在于，所述酿酒酵母多基因共表达载体为载体pScIKP。

4.权利要求1至3任一项所述基因重组酿酒酵母的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.通过PCR扩增分别得到α-淀粉酶基因、糖化酶基因和酸性蛋白酶基因序列；将糖化酶基因的1566位的核苷酸残基C人工突变成为T，酸性蛋白酶基因的1155位的核苷酸残基C人工突变成为T；

S2.将α-淀粉酶基因、糖化酶基因和酸性蛋白酶基因接入酿酒酵母表达载体中，构建重组多基因共表达载体；

S3.将上述构建得到的重组多基因共表达载体用限制性内切酶切割，使之线性化后转化到酿酒酵母中，构建基因重组酿酒酵母。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，S2构建重组多基因共表达载体包括如下步骤：

S11.用限制性内切酶分别切割酿酒酵母表达载体、α-淀粉酶基因、糖化酶基因、酸性蛋白酶基因；

S12.将α-淀粉酶基因、糖化酶基因、酸性蛋白酶基因分别接入酿酒酵母表达载体，形成三个重组单基因载体；

S13.将含有载体启动子和终止子片段的完整的α-淀粉酶基因表达盒、糖化酶基因表达盒和酸性蛋白酶基因表达盒使用限制性内切酶分别从三种重组单基因载体上切下，然后以串联表达盒amy-ga-ap的形式逐个接入同一酿酒酵母表达载体中。

6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，S3中所述的限制性内切酶为Apa I。

7.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，S3中所述的转化是使用电转化法、冷冻法或化学试剂法进行转化。

8.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，S11中用于切割酿酒酵母表达载体、α-淀粉酶基因、糖化酶基因、酸性蛋白酶基因的限制性内切酶均为BamH I和Spe I；S13中使用的限制性内切酶为同尾酶Nhe I和Xba I。

9.根据权利要求4、5或8所述的构建方法，其特征在于，所述的α-淀粉酶基因为米曲霉的α-淀粉酶基因；所述的糖化酶基因为黑曲霉的糖化酶基因；所述的酸性蛋白酶基因为黑曲霉的酸性蛋白酶基因。