[发明专利]一种稳定分泌表达IL-24重组蛋白的细胞株及其构建和应用

权利要求书

1.一种稳定分泌表达IL-24重组蛋白的细胞株，其中宿主细胞为Flp-In-CHO细胞，IL-24基因被定点整合到Flp-In-CHO细胞的基因组中，所述IL-24重组蛋白带有His₆标签；所述细胞株能稳定分泌IL-24重组蛋白到细胞的培养上清中。

2.权利要求1所述稳定分泌表达IL-24重组蛋白的细胞株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：通过PCR扩增获得带有His₆标签的IL-24基因片段，将带有His₆标签的IL-24基因的CDS区序列亚克隆至具有Flp-In定点整合系统的pcDNA5/FRT质粒中；然后将重组质粒pcDNA5/FRT-IL-24与表达Flp重组酶的质粒pOG44共转染至Flp-In-CHO细胞中，所述Flp-In-CHO细胞的转录活性区域整合了Flp重组靶点；然后通过抗生素Hygromycin B筛选稳定表达的细胞株；最后，利用亲和层析对细胞株培养上清中的重组蛋白进行纯化。

3.权利要求1所述的细胞株在制备抗肿瘤药物中的应用。

4.根据权利要求3所述用途，其特征在于，所述肿瘤为食管癌或黑色素瘤。

5.权利要求1所述的细胞株分泌表达的IL-24重组蛋白。

6.权利要求5所述的IL-24重组蛋白在制备抗肿瘤药物中的应用。

7.根据权利要求6所述用途，其特征在于，所述肿瘤为食管癌或黑色素瘤。