[发明专利]一种用于检测猪流行性腹泻病毒的方法

权利要求书

1.一种用于检测猪流行性腹泻病毒的方法，包含RT-PCR的检测PED病毒，其特征在于：所述RT-PCR引物： 

PEDVF：AACGGTTCTATTCCCGTTGATG 

PEDVR：TAAATGAAGCACTTTCTCACTATC 。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测猪流行性腹泻病毒的方法，其特征在于：PED病毒RT-PCR的检测方法首先提取待检样的RNA，通过反转录形成cDNA，然后以反转录的cDNA为模板，建立PEDV的RT-PCR检测，RT-PCR的产物为663bp。 

3.根据权利要求2所述的PEDV的RT-PCR检测方法，其特征在于：所述的RT-PCR检测方法具体包括以下步骤： 

(1)待检样RNA的提取； 

(2)将提取的RNA通过反转录成cDNA，反应程序和反应体系如下： 

取总RNA5.75ul、反向引物RNA1ul、10mmol/L dNTPs0.5ul、5×Buffer2ul、100U/ul反转录酶AMV0.5ul、RNA酶抑制剂0.25ul，总体积10ul，50℃反应1h，95℃灭活5min，即得cDNA。 

(3)将获得的反转录产物进行PCR扩增，反应体系和反应程序如下： 

取RT产物1ul，2×Mix12.5ul，正向引物和反向引物各1ul，高压灭菌水9.5ul，总体积25ul，置入PCR仪，反应条件：94℃30second，56℃30second，72℃20second，35个循环，即得扩增产物。 

(4)RT-PCR产物的检测结果：根据琼脂糖凝胶电泳检测的DNA图谱，若扩增出分子量为663bp的特异DNA条带则标记为携带PED病毒，若未扩增出特异DNA条带则表示未携带PED病毒。