[发明专利]一种凡纳对虾SWD基因亚型Lv-SWDi、其编码的氨基酸序列以及克隆方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种凡纳对虾SWD基因亚型Lv-SWDi、其编码的氨基酸序列以及克隆方法，属于分子生物学技术领域。

背景技术

在动物进化过程中，随着外界环境中病原细菌和病毒等微生物的不断刺激造成的各种挑战，动物自身的免疫系统也在不断进化，从而能够使物种进化、延续到今天。到目前为止，依据动物体所处进化地位的高低，已经形成了两大类免疫系统，一类是先天免疫系统，另一类是获得性免疫系统。先天免疫系统主要存在于无脊椎动物体内，然而，获得性免疫系统主要存在于高等的脊椎动物体内，而且，高等的脊椎动物体内仍然存在先天免疫。

对于甲壳类动物来说，先天免疫系统是它们防御细菌、真菌、病毒侵染的唯一防线，尤其是细胞免疫和体液免疫两种免疫方式，它们和甲壳类动物自身的物理屏障共同担负着所有的免疫防御功能。先天免疫系统中的细胞免疫和体液免疫，在防御病原入侵的过程中，几乎是协同作用的，但是，也有些文献报道称在病原入侵的最初阶段，主要是体液免疫起到了主要的免疫监视和防卫作用。体液免疫在发挥作用的过程中，受到了多种信号途径的调节，包括目前研究的十分清楚的Toll途径和IMD途径，在这两条信号途径的末端存在着多种免疫效应分子来执行免疫防御功能。其中，抗菌肽分子是一类非常重要的能够针对细菌和真菌的入侵发挥免疫效应的分子，而且，它也是甲壳类无脊椎动物与免疫反应相关的多种信号通路的最终发挥清除作用的最主要的功能分子。目前，发现的抗菌肽分子种类繁多，其中有一类分子的结构比较典型，在其氨基酸序列中存在着一个乳清酸性蛋白结构域，简称WAP结构域，这个结构域的特点就是存在着由8个半胱氨酸残基形成的4对二硫键。根据分子中存在的WAP结构域的个数，我们人为地将其分为具有单个WAP结构域的抗菌肽分子或者称为SWD抗菌肽分子、具有双WAP结构域的抗菌肽分子或者称为DWD抗菌肽分子。

多数抗菌肽分子不仅可以在甲壳类动物体内发挥清除细菌、真菌的作用，也可以在体外行使抗菌功能以及蛋白酶活性抑制剂作用。因此，一旦将甲壳类动物內源性的抗菌肽进行体外表达与纯化，这些蛋白质其在食品行业的抗菌方面就会具有非常广阔的应用前景，它们可以成为良好的绿色无污染的食品抗菌制剂。此外，与目前我国医疗行业广泛使用的抗生素、抗菌剂有着很大的不同，源于甲壳类动物的抗菌肽分子发挥抗菌作用的同时，不会引起耐药性问题，因为抗菌肽分子发挥作用的过程是直接作用于细菌、真菌细胞壁的某一部位的氨基酸序列，从而引起细菌、真菌细胞壁某一部位的水解产生漏洞因而引起细菌、真菌细胞的内溶物外泄，使其死亡而被清除，所以，这类抗菌肽分子在医药行业也存在较大的应用前景。

凡纳对虾是上世纪九十年代由美国引进我国的一个虾类品种，目前，在我国养殖规模非常大，是一类经济价值较高的水产养殖动物。而且，这类虾的优良的抗病品质，在养殖过程中发挥了巨大作用，使我国水产养殖业能够良性发展。此外，凡纳对虾在科研研究方面也是一个十分典型的甲壳类模式生物，它的优良的抗菌和抗病毒品质一直是先天免疫相关研究人员重点追踪的科学问题。凡纳对虾SWD基因亚型Lv-SWDi编码的抗菌肽分子在动物体内先天免疫系统中是一类重要的免疫效应分子，尤其，Lv-SWDi抗菌肽分子的蛋白酶活性抑制剂作用在体外可以抑制细菌繁殖过程中产生的蛋白酶的活性，从而将细菌分泌蛋白酶水解环境中的有机物从而获得可吸收的营养物质的途径彻底切断，将细菌活活饿死，而且这种蛋白酶活性抑制剂作用不存在专一性，Lv-SWDi抗菌肽分子的蛋白酶活性抑制剂作用具有广泛的抑制效果，凡是细菌繁殖过程中产生的蛋白酶的活性都可以被彻底抑制，因而，具有光谱抑制作用。所以，SWD基因亚型Lv-SWDi编码的凡纳对虾SWDi抗菌肽分子在食品抗菌、医疗抗生素方面具有良好的应用空间。

发明内容

本发明的目的在于提供一种凡纳对虾SWD基因亚型Lv-SWDi的核苷酸序列，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1，具有421bp。

本发明的另一个目的在于提供一种凡纳对虾SWD基因亚型Lv-SWDi编码的氨基酸序列，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2，具有92个氨基酸残基。

同时，本发明还提供该凡纳对虾SWD基因亚型Lv-SWDi基因的克隆方法。

本发明所提供的SWD基因亚型Lv-SWDi来源于凡纳对虾（Litopenaeus vannamei），命名为Lv-SWDi基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1，具有421bp。