[发明专利]多价抗体片段与其三聚复合物

说明书

本发明涉及产生多价Fab片段的方法。特别是，本发明涉及藉由在一哺乳动物细胞中共表达包含一Fab片段的一重链部分与一框架内融合的类胶原蛋白胜肽的一基因构筑体以及由IgG的一轻链部分所组成的一基因构筑体的三聚体Fab片段的产生的方法。使用本发明方法所产生的分子的用途也被描述。

技术领域

本发明涉及产生多价Fab片段的方法。特别是，本发明涉及藉由在一哺乳动物细胞中共表达包含一Fab片段的一重链部分与一框架内融合的类胶原蛋白胜肽的一基因构筑体以及由IgG的一轻链部分所组成的一基因构筑体的三聚体Fab片段的产生的方法。

背景技术

功能性亲和(力)(functional affinity(avidity))为一抗原与许多抗原决定因素(antigenic determinants)的整体结合能力的程度。对于结合至非常接近一目标细胞的一群组的特异相同配体而言，抗原结合伙伴的聚合大幅增加它们的效用(或价数(valency))，引起更大的目标结合效力、减缓的分离率与可延长配体的调节与促进生物潜力的交联作用。

一单链变异片段(single-chain variable fragment,scFv)为免疫球蛋白的重链(V_H)与轻链(V_L)的变异区的一融合蛋白，藉由一短的连结胜肽来连结。与双价免疫球蛋白G(IgG)对应物(counterpart)相较，scFv的主要缺点为产物的单价，其妨碍由于多价结合增加的亲和力。为了增加亲和力，已针对scFv的多聚化发展了许多策略。

藉由使用三聚体化区域的三价单链抗体片段(scFv)融合蛋白的重组产生已被报导，三价单链抗体片段(scFv)融合蛋白包括一型前胶原蛋白(procollagen)的C前胜肽(C-propeptide)、胶原凝集素(collectin)家族蛋白质的一卷曲螺旋颈域(coiled-coil neckdomain)、FasL的一C端部分与一噬菌体(bacteriophage)T4弹力素(fibritin)折叠区(Hoppe,H.J.,P.N.Barlow,et al.(1994).A parallel three stranded alpha-helicalbundle at the nucleation site of collagen triple-helix formation.FEBSLett344(2-3):191-195;Frank,Kammerer et al.2001Stabilization of shortcollagen-like triple helices by protein engineering.J Mol Biol308(5):1081-1089;Holler,N.,A.Tardivel,et al.(2003).Two adjacent trimeric Fas ligands arerequired for Fas signaling and formation of a death-inducing signalingcomplex.Mol Cell Biol23(4):1428-1440.)。具有自身三聚体化与来自C-或N-端方向的异源融合蛋白质的增殖能力的短α螺旋类胶原蛋白胜肽也已在EP1798240B1中被报导。于EP1798240B1中使用的异源融合区被呈现于scFv抗体片段中。然而，在治疗应用的多价形式中，scFv具有缺点。