[发明专利]一种嗜盐古生菌假溶源性噬菌体SNJ1的鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种噬菌体的鉴定方法，具体涉及一种嗜盐古生菌假溶源性噬菌体SNJ1的鉴定方法，适用于缩短鉴定周期、简化鉴定工序、降低成本。

背景技术

嗜盐古生菌生活在高盐（1.5～5M）的环境中，包括一些盐湖和盐厂，在一些盐浓度接近饱和（约为35%w/v）的环境中，嗜盐古生菌依然以较高的密度存在（约为108cell/mL）。

噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的细菌病毒的总称，作为病毒的一种，噬菌体具有病毒特有的一些特性：个体微小，不具有完整细胞结构，只含有单一核酸。噬菌体基因组含有许多个基因，但所有已知的噬菌体都是在细菌细胞中利用细菌的核糖体、蛋白质合成时所需的各种因子、各种氨基酸和能量产生系统来实现其自身的生长和增殖。一旦离开了宿主细胞，噬菌体既不能生长，也不能复制。作为整个生态系统的一个重要组成部分，噬菌体在基因的转移、生物的进化等方面展示了重要的意义。同时，噬菌体在遗传学方面的研究以及分子生物学等方面的研究都起到了十分重要的作用。据统计，目前大约已有5450株的病毒被分离、报道。但是，截至到目前为止，仅有不超过30株的嗜盐古生菌噬菌体被分离。

在噬菌体与宿主长期共存的环境中，溶源与裂解是两种常见的相互作用形式。溶源是指温和噬菌体在吸附和侵入宿主细胞后，将噬菌体基因组整合在宿主细胞染色体上，随宿主DNA复制而同步复制，随宿主细胞分裂而传递到两个子细胞中，宿主细胞可正常繁殖，以上过程称为“溶源周期”，但在一定条件下，噬菌体基因组可进行复制，产生并释放子代噬菌体，即“裂解周期”。裂解是指烈性噬菌体在宿主细胞内能够完成增殖过程，产生并释放大量子代噬菌体并裂解宿主细胞。但在对嗜盐古生菌及其噬菌体的研究中发现，除了上述溶源与裂解外，二者还有一类假溶源存在形式。简单的说，假溶源就是指噬菌体基因组在进入宿主细胞后，噬菌体的DNA不整合到宿主的染色体上，而是以质粒的形式独立存在，随着宿主的生长不断的向周围环境中释放噬菌体子代而宿主自身不裂解。

嗜盐古生菌假溶源性噬菌体通常采用以下方法进行鉴定：首先将待检测嗜盐古生菌涂布在固体培养基上培养以形成单菌落，此过程大约5～7d，然后分别挑选单菌落至盛有新鲜的液体培养基的试管中培养3～4d，再取一定量的液体培养物离心，并用移液器取2～3μL上清液滴在倒好的双层平板上（双层平板的上层含有指示菌），然后放到恒温箱中培养2d，之后观察是否在双层平板上形成透明的噬菌斑。整个鉴定过程大约耗时10～13d，不仅鉴定周期较长，而且鉴定工序较复杂，成本较高。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中存在的鉴定周期较长，鉴定工序较复杂，成本较高的问题，提供一种鉴定周期较短、简单易行、成本较低的嗜盐古生菌假溶源性噬菌体SNJ1的鉴定方法。

为实现以上目的，本发明提供了以下技术方案：

一种嗜盐古生菌假溶源性噬菌体SNJ1的鉴定方法，该方法依次包括以下步骤：

步骤一：一号培养基、二号培养基的配置：

所述一号培养基的配置方法为：先称取NaCl250g、MgCl₂·6H₂O30g、酵母粉2g、乳清蛋白水解物2.5g、琼脂10～15g并加水混合定容至1000mL以形成固液混合物，再将该固液混合物于0.69×10⁵Pa、100～125℃下灭菌10～60min以得到一号培养基；

所述二号培养基的配置方法为：先称取NaCl250g、MgCl₂·6H₂O30g、酵母粉2g、乳清蛋白水解物2.5g、琼脂4～15g并加水混合定容至1000mL以形成固液混合物，然后将该固液混合物于0.69×10⁵Pa、100～125℃下灭菌10～60min以得到二号培养基；

步骤二：待测嗜盐古生菌的培养：先向平皿中倒入一号培养基，待一号培养基凝固后在其上均匀涂布待测嗜盐古生菌，再将涂布有待测嗜盐古生菌的一号培养基于42～45℃培养至形成单菌落；

步骤三：双层平板的制备：先向平皿中倒入一号培养基，待一号培养基凝固干燥后，将培养到对数期的指示菌液与42～45℃下的二号培养基混合均匀以形成混合培养液，然后将该混合培养液倒入一号培养基上，并使混合培养液凝固以形成双层平板，其中，所述指示菌为Natrinema sp.J7-2嗜盐古生菌，所述指示菌液的体积为300μL，二号培养基的体积为4.7～5mL；