[发明专利]一株羊肚菌菌株及其培养方法

说明书

技术领域

本发明属微生物技术领域，具体涉及一种新的羊肚菌菌株及其培养方法。

背景技术

羊肚菌属(Morchella)真菌，是世界著名的名贵野生食用菌，羊肚菌(M.esuclenta(L.)Pers.)是云南产羊肚菌属真菌的主要种类之一，分布较为广泛，在金沙江流域大量发生。目前羊肚菌属真菌的人工栽培由于产量不稳定，尚不能形成商业化和规模化，市场上的羊肚菌大多来自野生。近年来受气候条件恶化和过度采集等不良因素的影响，野生羊肚菌自然产量大幅下降。研究表明，在羊肚菌原生境，采用人工菌种和配套的技术措施，能够有效地提高单位面积内羊肚菌的产量。

在羊肚菌原生境促繁技术中，优良菌种的获得是关键技术环节。目前国内大多采用固体制种技术，而很少使用液体发酵。对于固体制种技术而言，液体发酵技术具有具有菌丝生长良好、菌球均匀、较少污染、培养基利用充分的优点。本专利采用液体发酵技术制作优良的液体菌种，对后期仿生学促繁和人工栽培提供保障。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术羊肚菌的菌丝体生物量较低、菌核生成能力较弱、菌丝生长不均匀、污染率高、培养基利用不充分等不足。其目的是提供一种具有产量高、菌核生成能力强、抗污染的新的优良羊肚菌菌株及其培养方法，为羊肚菌野生资源保护促繁提供优良菌种。

为解决上述技术问题和达到本发明目的，本发明的技术方案如下：

1.一株羊肚菌（Mochella esculenta）M-02^#菌株CGMCC No.7058。

2.羊肚菌（Mochella esculenta）M-02^#菌株CGMCC No.7058液体菌种的培养方法，其步骤如下：

（1）将羊肚菌（Mochella esculenta）M-02^#菌株CGMCC No.7058的菌丝体接种到试管琼脂培养基斜面上，于18-24℃下培养5-7d，获得试管菌种，所述的试管琼脂培养基为改良PDA培养基，其配方为马铃薯30%，葡萄糖2%，K₂HPO₄0.5%，琼脂2%，余量为水，所述的百分数是质量分数；

（2）将试管菌种接种到盛有200mL液体培养基的500mL三角瓶中，于20-26℃下摇床培养，转速为120-160r/min，培养时间5-7d，获得一级液体菌种，所述的液体培养基配方为：5-10%麸皮、0.5-1%黄豆粉、0.5-1%麦芽糖、1-2%可溶性淀粉，余量为水，所述的百分数是质量分数；

（3）将获得的一级液体菌种接种到25L自动发酵生产线的发酵罐中，通气比为1：0.8，搅拌转速为120-160r/min，接种量为5-10%质量分数，罐压：0.04Mpa；pH为7.2-7.5；温度为22-26℃；通气培养72-96h，即获得羊肚菌（Mochella esculenta）M-02^#菌株CGMCC No.7058液体菌种。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：一是菌丝体生物量高，可达25g/kg，而固体菌包菌丝体生物量大约在5-12g/kg；二是菌核生成能力强，在直径10cm的平板上金黄色菌核颗粒多或覆盖面积大，菌核颗粒可达50粒，单颗粒直径可达1cm；三是抗污染、培养污染率低，≤2%。同时采用液体发酵法时间短，大约72-96h，而普通的固体包培养需要15d以上。

本发明利用云南原产地羊肚菌子实体筛选出优良菌株，为羊肚菌野生资源保护促繁提供了优良菌种。

本发明所提供的羊肚菌（Mochella esculenta）M-02^#菌株CGMCC No.705保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2013年01月11日；保藏号：CGMCC No.7058。

序列表中SEQ ID NO：1所示的是实施例1中⑶ITS序列分析时对菌株进行ITS序列扩增所用的ITS4引物的碱基序列。

序列表中SEQ ID NO：2所示的是实施例1中⑶ITS序列分析时对菌株进行ITS序列扩增所用的ITS5引物的碱基序列。

具体实施方式

下述实施例中使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，均可从商业途径得到。