[发明专利]包裹纳米金颗粒的PEG功能化的PAMAM树状大分子载体的基因转染方法

权利要求书

1.一种包裹纳米金颗粒的PEG功能化的PAMAM树状大分子载体的基因转染方法，包括：

（1）将mPEG-COOH溶于DMSO中，用EDC的DMSO溶液活化，得到活化好的mPEG溶液；

称取第五代PAMAM树状大分子溶于DMSO中，按照mPEG-COOH/G5.NH₂摩尔比为10/1，加入活化好的mPEG溶液，室温下磁力搅拌，反应得到G5.NH₂-mPEG₁₀溶液；

（2）在上述G5.NH₂-mPEG₁₀溶液中逐滴加入HAuCl₄水溶液，搅拌后快速加入NaBH₄溶液，还原反应结束后，将反应产物透析，然后进行冷冻干燥处理，得到反应产物Au⁰-G5.NH₂-mPEG₁₀；

（3）将Au⁰-G5.NH₂-mPEG₁₀与pDNA或siRNA制备载体/基因复合物溶液；

（4）采用上述载体/基因复合物溶液进行细胞转染。

2.根据权利要求1所述的一种包裹纳米金颗粒的PEG功能化的PAMAM树状大分子载体的基因转染方法，其特征在于：步骤（1）中所述的mPEG的分子量为2000或5000。

3.根据权利要求1所述的一种包裹纳米金颗粒的PEG功能化的PAMAM树状大分子载体的基因转染方法，其特征在于：步骤（2）中所用的HAuCl₄与G5.NH₂-mPEG₁₀的摩尔比为25:1或50:1。

4.根据权利要求1所述的一种包裹纳米金颗粒的PEG功能化的PAMAM树状大分子载体的基因转染方法，其特征在于：步骤（2）中所述的透析为将反应产物在蒸馏水中透析3天，一天3次，采用截留分子量为14000的透析袋。

5.根据权利要求1所述的一种包裹纳米金颗粒的PEG功能化的PAMAM树状大分子载体的基因转染方法，其特征在于：步骤（2）中所得到的Au⁰-G5.NH₂-mPEG₁₀为{(Au⁰)₂₅-G5.NH₂-mPEG2k₁₀}、{(Au⁰)₅₀-G5.NH₂-mPEG2K₁₀}、{(Au⁰)₂₅-G5.NH₂-mPEG5K₁₀}或{(Au⁰)₅₀-G5.NH₂-mPEG5K₁₀}。

6.根据权利要求1所述的一种包裹纳米金颗粒的PEG功能化的PAMAM树状大分子载体的基因转染方法，其特征在于：步骤（3）中所述的Au⁰-G5.NH₂-mPEG₁₀与pDNA或siRNA的N/P为0.5:1～10:1，所述的N/P为树状大分子的伯氨基与pDNA或siRNA骨架上磷酸基团摩尔比。

7.根据权利要求1所述的一种包裹纳米金颗粒的PEG功能化的PAMAM树状大分子载体的基因转染方法，其特征在于：步骤（3）中所述的pDNA为含有绿色荧光蛋白基因和荧光素酶基因的pDNA；所述的siRNA为Bcl-2基因的siRNA。

8.根据权利要求1所述的一种包裹纳米金颗粒的PEG功能化的PAMAM树状大分子载体的基因转染方法，其特征在于：步骤（3）中得到的载体/基因复合物在室温下孵育20-30min。

9.根据权利要求1所述的一种包裹纳米金颗粒的PEG功能化的PAMAM树状大分子载体的基因转染方法，其特征在于：步骤（4）中所述的细胞转染中的细胞为Hela细胞，具体操作为将Hela细胞种植于24孔板，加入含有10%FBS的DMEM培养基，于37℃、5%CO₂培养12-24小时；转染前更换新鲜无血清DMEM培养基，然后将步骤（3）得到的载体/基因复合物溶液加到24孔板中，摇匀，37℃培养4小时后更换含10%FBS的DMEM培养基，继续培养24小时。