[发明专利]检测鸡三种免疫抑制病病毒的基因芯片及试剂盒与方法

权利要求书

1.一种检测鸡三种免疫抑制病病毒的基因芯片，其特征在于：在芯片基质上设置有鸡淋巴白血病病毒ALV的四个亚群A亚群、C亚群、D亚群和J亚群、鸡传染性贫血病毒CAV、禽网状内皮增生症病毒REV的特异性探针序列，所述特异性探针序列如下：

鸡淋巴白血病病毒A亚群（A1），TTTTTTTGTCTCAGGGGGAGGCCACACGGTTTCTC；

鸡淋巴白血病病毒A亚群（A2）,TTTTGGTTGGTCTAGACAGGAGGCCACGCGGTTTC；

鸡淋巴白血病病毒A亚群（A3）,TTTTGGATGGACTAGACAGGAAGCCACACGGTTCC；

鸡淋巴白血病病毒A亚群（A4），TTTTTGCTTTCAGATTGGTCCAGGCCGCAACTCAC；

鸡淋巴白血病病毒C亚群（C1），TTTTGGATGTGTATATTTCGCCCCAAGGGCCACTG；

鸡淋巴白血病病毒D亚群（D1），TTTTTTTTGGCCGGGAAGAGGTGACACACATCCTC；

鸡淋巴白血病病毒C亚群（J3），TTCTTAGTCTACAGTCAGCGACCTCGCCATTCCGC；

鸡淋巴白血病病毒C亚群（J4），CTTAGTCTACAGTCAGCTACCTCTCCCTTCCGCAC；

鸡传染性贫血病病毒(CAV),TTTTTTTTTGGGCAGTGAATCGGCGCTTAGCCG；

网状内皮增生症病毒(REV),TTTTTTTTTCTTGCTCGGGGTCGCCGTCCTACA。

2.一种检测鸡三种免疫抑制病病毒的基因芯片试剂盒，其特征在于包括如下组件：

（1）权利要求1所述的基因芯片；

（2）七条引物：

鸡淋巴白血病病毒ALV的A、C、D、J四个亚群通用上游引物J-U:

5’-GGATGAGGTGACTAAGAAAG-3’；

J亚群下游引物J-L:5’-CGAACCAAAGGTAACACACG-3；

A、C和D亚群通用下游引物Tong:5'-CTGTAGCCATATGCACC-3'；

CAV上游引物C-U:5’-ACATACCGGTCGGCAGTAGG-3’；

CAV下游引物C-L:5’-AGCTCGCTTACCCTGTACTC-3’；

REV上游引物R-U:5’-CTACGGATTCAGTCCGGATC-3’；

REV下游引物R-L:5’-CATACTGAGCCAATGGTTGTA-3’；

且J-L、Tong、C-L与R-L的5’端有Cy3荧光标记。

3.根据权利要求2所述的基因芯片试剂盒，还包括除通用引物和DNA探针之外的PCR扩增所需试剂、杂交液、芯片洗液。

4.根据权利要求3所述的基因芯片试剂盒，所述杂交液的成分为：3×SSC溶液，25%甲酰胺，0.2%SDS，5×Denhardt溶液。

5.根据权利要求3所述的基因芯片试剂盒，所述芯片洗液包括洗液A和洗液B；洗液A的配方为2×SSC，0.2%SDS；洗液B为0.2×SSC。

6.根据权利要求2所述的基因芯片试剂盒，还包括PCR阴性对照模板和阳性对照模板，所述阴性对照模板为双蒸水，所述阳性对照模板为CAV参考毒株CUX的质粒DNA。

7.根据权利要求2～6任一所述的基因芯片试剂盒，所述七条引物混合存放在两个引物管中，；两个引物管中的引物及其混合浓度比例为：J-U:J-L:Tong=5:2:3；（C-U+C-L）:（R-U+R-L）=1:3。