[发明专利]一种枯草芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法和在畜禽养殖中的应用，尤其适用于畜禽饲料添加剂，属于饲用微生物添加剂技术领域。

背景介绍

抗生素在畜禽产品中的长期使用带来的畜禽类产品的食品安全性问题已经越来越受到人们的关注，因为长期、大量使用抗生素、抗菌药物抑制病原菌的同时，动物肠道的正常菌群也受到抑制，动物肠道微生态平衡被破坏，耐药性、药物残留等问题给动物和人类的健康带来了巨大的威胁和危害，所以寻求有效、安全、绿色、天然的饲用抗生素替代产品，成为了畜禽养殖行业关注的热点问题。

微生态制剂是一种天然的活性微生物制剂，具有无毒、无抗药性、无残留、无副作用的特点。近年来，微生态制剂对于动物肠道微生态平衡的调节作用和提高动物机体免疫力，进而提高养殖动物的健康水平和生产性能的功效已经得到人们的普遍认可，是公认的饲用抗生素的最佳替代品之一。

枯草芽孢杆菌是农业部《饲料添加剂品种目录》所列菌种，是微生物饲料添加剂的常用菌种。枯草芽孢杆菌对人和动物没有毒性，在生长过程中可以产生高活性的蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶，能够促进畜禽对饲料的消化利用率；能够产生抑菌代谢物，抑制肠道病原菌的生长；该菌是严格好氧细菌，进入肠道后通过生物夺氧的作用为肠道乳酸菌类和双歧杆菌类厌氧微生物提供厌氧环境从而促进有益菌的生长，调节肠道微生态平衡。

因此，筛选一株性能优良的枯草芽孢杆菌，并开发出低成本、高产量，能长期保持活性的菌粉产品，对于发展绿色饲料，保证食品安全具有重要的意义。

发明内容

本发明的第一个目的是提供了一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WEI-2CGMCCNo.7744。

从健康仔猪粪便中分离、筛选得到一株芽孢杆菌，经16S rDNA测序鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtills)，命名为WEI-2，并于2013年6月19日送中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCC No.7744，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所邮编：100101电话：86-10-64807596。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WEI-2CGMCC No.7744属革兰氏阳性细菌，杆状，芽孢中生或偏中生，孢囊膨大但不显著，7％氯化钠中生长，pH5.7生长，可利用阿拉伯糖、木糖和甘露醇产酸，可利用葡萄糖和柠檬酸盐，水解淀粉，液化明胶，硝酸盐还原试验为阳性，V-P测定为阳性。生长温度范围在30-40℃，适宜pH值的范围7.0-8.0，是严格好氧菌。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WEI-2CGMCC No.7744在pH为2-3的人工胃液中保持3h，存活率90％；在人工胃肠消化液中保持26h，活菌数可以维持在10⁸CFU／mL，这个时间符合肠道生理周期，能够保证菌体发挥益生作用；在猪胆盐浓度为20g／L的人工猪胆盐溶液中，保持3h，存活率为75％，这个胆盐浓度远远高于动物体内的0.3g／L的平均胆盐浓度。

上述特性评价试验中，所述人工胃液包括如下成分：每1000mL水中含有胃蛋白酶3g，NaCl2g，用盐酸调pH至2-3；所述人工胃肠消化液包括如下成分：人工胃液pH调至3，人工肠液包括如下成分：每1000mL水中含有胰蛋白酶10g，KH₂P0₄7g，调pH至7.5，测试过程中，菌体在人工胃液中保持2h，然后接入人工肠液中保持24h；所述人工猪胆盐溶液成分包括：每1000mL水中含有胰蛋白酶1g，猪胆盐20g，NaCl5g，调pH至7.0。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WEI-2CGMCC No.7744的发酵上清液中同时具有淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶的活性，三种酶的产量分别为246U／mL，683U／mL和152.6U／mL。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WEI-2CGMCC No.7744对大肠杆菌、沙门氏菌、藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌均有抑菌作用，抑菌圈直径达到20-30mm。