[发明专利]一种枯草芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌饲料添加剂，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为WEI-2，保藏编号为CGMCC No. 7744。

2.一种枯草芽孢杆菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为WEI-2 CGMCC No. 7744作为畜禽饲料添加剂的制备方法，具体步骤如下：

1)斜面菌种的活化：从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WEI-2 CGMCC No. 7744的保藏甘油管中挑一环菌液划线于营养琼脂平板，于32-37℃，培养15-20h，使芽孢杆菌复壮，并长出单菌落，挑单菌落划线于斜面培养基进行活化，所述斜面培养基为营养琼脂，配方为：每1000mL水中含有：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂15-20g， pH值为7.2-7.4，常规灭菌；

2)种子摇瓶的制备：从上述培养好的斜面上挑一环菌种接于装有250-300mL液体种子培养基的1000mL三角瓶中，于35-37℃，振荡培养20-30h，即得枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) WEI-2 CGMCC No.7744的摇瓶种子液，所述摇瓶种子培养基的配方为：每1000mL水中含有：蛋白胨20g，酵母膏10g，三水合磷酸氢二钾1g，一水合硫酸锰0.1g，pH值为7.4，常规灭菌，

3)种子罐的培养：将上述制备好的摇瓶种子液按照1% (v/v)的接种量接入装有种子发酵培养基的种子发酵罐中，于35-37℃，培养20-25h，搅拌转速为250-300rpm，控制适当通气量，并加入适量消泡剂，得到二级种子发酵液，所述种子发酵培养基与摇瓶种子培养基的配方一致；

4)生产发酵：将上述制备好的种子发酵液按照1-2% (v/v)的接种量接入装有发酵培养基的生产发酵罐中，于35-37℃，发酵25-30h，搅拌转速为250-300rpm，控制适当通气量，并加入适量消泡剂，发酵结束获得枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) WEI-2 CGMCC No. 7744的活菌发酵液，所述发酵培养基的配方为：每1000mL水中含有：蛋白胨20g，酵母膏5g，葡萄糖10g，三水合磷酸氢二钾1g，一水合硫酸锰0. 15g，七水合硫酸镁0.3g，pH值为7. 2；

5)发酵液后处理：发酵结束后的发酵液通过高速管式离心机富集菌体后转移至混合搅拌罐中，按照载体与菌泥的质量比为2:1-3:1的比例向混合搅拌罐中加入载体，混合均匀，同时将喷雾干燥设备的蒸汽压力保持在0.3-0.6MPa，进口温度达到180-200℃，出口温度达到110-140℃，塔内压力保持在-12-18Pa，然后打开进料罐阀门，开始水喷雾，待压力稳定，出口温度保持在80-90℃时，打开打浆泵，将菌泥与载体的混合物料打入缓冲罐，开始喷雾干燥，干燥过程中保持罐内压力及进出口温度的稳定，干燥后的干粉粉碎至80目以上，获得枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) WEI-2 CGMCC No. 7744的活性干燥菌粉，利用营养琼脂平板对活性干燥菌粉进行计数，根据计数结果，利用载体将活菌含量稀释至≥200亿CFU/g，得到成品菌粉，所述载体为可溶性淀粉，所述高速管式离心机收集菌体的转速为15000-20000rpm。

3.根据权利要求1所述枯草芽孢杆菌饲料添加剂的应用，其特征在于，枯草芽孢杆菌WEI-2作为畜禽饲料添加剂的应用时按照0.05-0.l‰ 拌全价饲料。